慢性腦缺血大鼠OXR的表達(dá)及天麻鉤藤飲的干預(yù).pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文慢性腦缺血大鼠OXR的表達(dá)及天麻鉤藤飲的干預(yù)姓名：呂瑞娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張博愛賈延劼20070501鄭州人學(xué)2007如；I[61It學(xué)砭論文中文摘要習(xí)記憶障礙的作用。另有研究表明天麻鉤麟飲能通過降低NMDA受體活性、抑制興奮性氨基酸神經(jīng)毒性等途徑發(fā)揮腦保護(hù)作用。鑒于以上考慮，本研究首先通過結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈法建立慢性腦缺血大鼠模型，采用免疫組化、免疫熒光雙標(biāo)組化技術(shù)觀察慢性腦缺血大鼠腦組織OX

2、tR、OX2R的表達(dá)及其隨缺血時問的變化，探討慢性腦缺血能否導(dǎo)致OXR表達(dá)變化及其意義。在上述研究的基礎(chǔ)上，探討天麻鉤藤飲能否通過Orexin系統(tǒng)發(fā)揮其腦保護(hù)作用，從而進(jìn)一步證實天麻鉤藤飲對慢性腦缺血的治療作用。方法1動物分組108只SD大鼠(雌雄各半)，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、治療組，每組又分為15d、30d、60d三個亞組，每個亞組12只。各假手術(shù)組僅行頸前切開，不結(jié)扎頸總動脈，術(shù)后立即用蒸餾水(灌胃量與治療組相當(dāng))灌胃15d、3

3、0d、60d；各模型組分別于建模成功后立即用蒸餾水(灌胃量與治療組相當(dāng))灌胃15d、30d、60d；治療組15d、30d、60d分別于建模成功后立即用天麻鉤藤飲(059kg1d。)灌胃15d、30d、60d。2慢性腦缺血大鼠模型建造參照Yamada等制作慢性腦缺血大鼠模型的方法制作模型。3大鼠學(xué)習(xí)記憶能力測試采用水迷宮法進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶功能測定。4腦組織切片制備和腦組織OXR的免疫組化表達(dá)測定及免疫熒光雙標(biāo)組化和HE染色觀察各亞組大鼠于各自

4、時間終點斷頭處死，處死后取腦組織，10％福爾馬林固定、常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)冠狀切片。每只大鼠腦組織標(biāo)本取連續(xù)切片，分別用OXtR、OX2R抗體進(jìn)行免疫組化染色。嚴(yán)格按sP染色試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化染色，光鏡下采用盲法觀察。鏡下在每張切片相同部位的皮質(zhì)、海馬區(qū)隨機(jī)計數(shù)5個視野1000個細(xì)胞，計出陽性細(xì)胞數(shù)。用圖像分析儀分析每張切片ox2R在海馬周圍神經(jīng)纖維著色的平均灰度值。每只大鼠腦組織標(biāo)本取連續(xù)切片分別用OXlR、OX2R抗體與NSE抗