針刺對(duì)正常哺乳動(dòng)物發(fā)育前后下丘腦—垂體—性腺軸系調(diào)節(jié)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.應(yīng)用電生理技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)，探索針刺對(duì)正常哺乳動(dòng)物發(fā)育前后下丘腦—垂體—性腺(HPG)軸系的調(diào)節(jié)。 2.觀察針刺的這種調(diào)節(jié)是否對(duì)正常哺乳動(dòng)物的攝食行為及體格發(fā)育產(chǎn)生影響。 3.探討性發(fā)育的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控機(jī)制及針刺的調(diào)節(jié)作用。 方法：1.將幼年雄性家兔分為青春發(fā)育前對(duì)照組、成年對(duì)照組和針刺治療(EA)組，運(yùn)用電生理技術(shù)測(cè)定干預(yù)后的家兔下丘腦弓狀核(ARC)核團(tuán)放電的頻率。 2.根據(jù)雌雄Spra

2、gue-Dawley(SD)大鼠出生年齡和體重，確立為幼年期、青春發(fā)育早期、青春發(fā)育后期及成熟期四個(gè)年齡段。每個(gè)年齡段大鼠分為針刺穴位(EWA)組、針刺非穴位(ENA)組、非特異刺激(IC)組、正常對(duì)照(NC)組。每組雌雄各半。分別運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和實(shí)時(shí)定量PCR(real-timequantitativePCR)等方法測(cè)定下丘腦中促性腺激素釋放激素(GnRH)表達(dá)變化。 3.放免法測(cè)定上述實(shí)驗(yàn)家兔與大

3、鼠干預(yù)前后血清睪酮(T)與雌二醇(E2)值。 4.對(duì)干預(yù)后的雄性家兔與大鼠進(jìn)行附睪精子計(jì)數(shù)。 5.記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物干預(yù)前后體重的數(shù)值。 6.部分實(shí)驗(yàn)大鼠干預(yù)后的睪丸和卵巢進(jìn)行組織切片和HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察組織形態(tài)的變化。 7.將上述觀測(cè)指標(biāo)運(yùn)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。結(jié)果： 1.電生理的研究：青春期前對(duì)照組家兔ARC放電頻率為5.49±0.96次/秒，成年對(duì)照組ARC放電密度為

4、10.31±0.23次/秒，EA組ARC放電密度為8.07±0.32次/秒。與青春期前對(duì)照組相比，EA組及成年對(duì)照組ARC放電密度均顯著增加(P＜0.01)；EA組與成年對(duì)照組相比有顯著下降(P＜0.01)。家兔經(jīng)短時(shí)電針刺激后，青春期前對(duì)照組ARC放電頻率為6.33±0.58次/秒，成年對(duì)照組為5.92±0.43次/秒，EA組ARC放電頻率為4.31±0.43次/秒。EA組及成年對(duì)照組ARC放電密度與刺激前比較均顯著下降(P＜0.01

5、)；表明家兔青春期啟動(dòng)后，ARC的電活動(dòng)顯著增加；而電針刺激可有效抑制青春發(fā)育期及成熟期家兔ARC的這種電活動(dòng)。但青春期前對(duì)照組刺激前后比較無顯著差異(P=0.47)也表明電針刺激不能改變尚處于休眠狀態(tài)的ARC的電活動(dòng)。 2.RT-PCR和Real-timePCR結(jié)果：在青春發(fā)育早期的大鼠中，EWA組的下丘腦GnRH的表達(dá)與ENA組、IC組以及NC組分別比較發(fā)現(xiàn)有顯著下降(P＜0.01)；在成熟期的大鼠中，EWA組下丘腦GnRH

6、的表達(dá)較IC組與NC組分別亦有顯著下降(P＜0.01)，ENA組與IC組比較明顯降低(P＜0.01)；其他兩個(gè)年齡段組間比較無明顯差別(P＞0.01)。由此表明，電針刺激可有效抑制青春發(fā)育早期及成熟期大鼠下丘腦GnRH的表達(dá)。 3.激素測(cè)定：家兔EA組T值(11.71±1.72nmol/L)與青春期前對(duì)照組數(shù)值(7.39±0.87nmol/L)干預(yù)后比較無顯著差異(P＞0.05)；EA組、青春期前對(duì)照組分別與成年對(duì)照組T值(50

7、.27±3.31nmol.L)相比表現(xiàn)出顯著下降(P＜0.01)。在青春發(fā)育早期的雄大鼠中，干預(yù)后EWA組T值(1.39±0.15nmol/L)與ENA組T值(1.64±0.16nmol/L)分別較IC組數(shù)值(4.16±0.03nmol/L)與NC組數(shù)值(6.18±0.87nmol/L)明顯降低(P＜0.01)；在青春發(fā)育后期的雄大鼠中，干預(yù)后EWA組T值(4.26±0.62nmol/L)與IC組數(shù)值比較(7.85±0.85nmol/L

8、)有顯著的下降(P＜0.01)；成熟期的雄大鼠與青春發(fā)育早期的雄大鼠類似，干預(yù)后EWA組(3.89±0.72nmol/L)與ENA組T值(4.86±0.61nmol/L)分別和IC組(16.97±1.86nmol/L)與NC組T值(28.18±3.00nmol/L)兩兩比較顯著降低(P＜0.01)；但幼年期雄大鼠各組間干預(yù)后無顯著差異(P＞0.01)。大鼠E2值比較顯示，雖然各年齡段中EWA組與NC組間無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.01)，

9、但仍發(fā)現(xiàn)在青春發(fā)育期的雌大鼠中，干預(yù)后EWA組E2值較NC組E2值均有較明顯下降。上述結(jié)果表明，電針刺激可有效抑制青春發(fā)育期雄性家兔、青春發(fā)育早期及成熟期雄大鼠T的分泌，且青春發(fā)育期雌大鼠E2的分泌在電針刺激后也出現(xiàn)下降的現(xiàn)象，但幼年期大鼠的性激素分泌基本不受電針刺激的影響。 4.精子計(jì)數(shù)：雄性家兔睪丸精子計(jì)數(shù)在干預(yù)后的EA組(4.46±0.57×107個(gè)/ml)雖較幼年對(duì)照組(0個(gè)/ml)有顯著升高(P＜0.01)，但與成年對(duì)

10、照組(7.34±0.49×107個(gè)/ml)相比卻明顯下降(P＜0.01)。干預(yù)后的雄性大鼠精子計(jì)數(shù)在青春發(fā)育后期的EWA組(0.08±0.04×105個(gè)/ml)與IC組(0.37±0.05×105個(gè)/ml)及NC組(0.32±0.04×105個(gè)/ml)相比均有顯著下降(P＜0.01)；而成熟期雄大鼠各組之間無顯著差別(P＞0.05)。精子計(jì)數(shù)的變化表明，電針刺激后的雄性家兔及大鼠的精子生成被有效抑制。 5.體重：干預(yù)后，EA組(

11、2.52±0.04Kg)與成年對(duì)照組(2.56±0.04Kg)家兔體重較幼年對(duì)照組(1.98±0.04Kg)均有顯著增加(P＜0.01)，但EA組與成年對(duì)照組之間無明顯差別(P＞0.05)。而干預(yù)后大鼠中，除幼年期ENA組(135.25±4.73g)與NC組(156.18±6.07g)比較有顯著下降(P＜0.01)外，其余各年齡段中各實(shí)驗(yàn)組大鼠之間的體重?zé)o明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.01)。體重的改變代表著攝食行為及能量代謝的變化，由此表明

12、電針刺激基本未影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常攝食行為。 6.組織學(xué)改變：病理學(xué)組織切片顯示，在光鏡視野下(放大10倍)，幼年期及青春發(fā)育早期大鼠各干預(yù)組間均未見成熟精子及卵泡的形成；而青春發(fā)育后期和成年期大鼠均可見成熟精子及卵泡的形成，但各干預(yù)組間在組織學(xué)上未見顯著改變，這表明電針刺激對(duì)性激素分泌和精子生成的抑制效應(yīng)并非通過對(duì)性腺組織的改變來實(shí)現(xiàn)的。 結(jié)論：1.針刺腎俞、太溪、百會(huì)、命門等與生殖調(diào)控相關(guān)的腧穴，可以顯著抑制青春發(fā)育期