脂多糖介導(dǎo)的宮內(nèi)感染對(duì)子代大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸發(fā)育調(diào)節(jié)的影響.pdf

1、目的：觀察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）介導(dǎo)的宮內(nèi)感染對(duì)子代大鼠海馬鹽皮質(zhì)激素受體（mineralocorticoid receptor，MR）、糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoid receptor，GR）表達(dá)及下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamus-pituitary-adrenal，HPA）軸調(diào)節(jié)功能的影響，探究宮內(nèi)感染致子代大鼠學(xué)習(xí)記憶損傷的機(jī)制，為防治宮內(nèi)感染引起的以學(xué)習(xí)記憶功能障礙為基

2、礎(chǔ)的神經(jīng)精神后遺癥提供依據(jù)。
　　方法：10周齡雌性SD大鼠30只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按雌雄1:1配對(duì)，將孕鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（10只）和實(shí)驗(yàn)組（20只）。于孕第10天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組孕鼠腹腔內(nèi)注射LPS（66μg/kg）溶液，對(duì)照組孕鼠腹腔內(nèi)注射相同體積的生理鹽水。于子代大鼠出生后第48天時(shí)對(duì)其進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)研究：（1）神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)：每組隨機(jī)抽取20只子代大鼠，采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)子代大鼠對(duì)新環(huán)境的探索能力，采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)子

3、代大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力；（2）每組隨機(jī)抽取10只子代大鼠，經(jīng)心臟灌注固定后取大腦，制作石蠟切片，采用蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色法觀察子代大鼠海馬組織的病理學(xué)改變；（3）每組隨機(jī)抽取10只子代大鼠，經(jīng)心臟灌注固定后取大腦，制作冰凍切片，采用間接免疫熒光雙標(biāo)法比較子代大鼠海馬區(qū)MR和GR表達(dá)情況；（4）每組隨機(jī)抽取10只子代大鼠，迅速斷頭后冰上取腦，剝離海馬，采用蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)（即western blot

4、ting）觀察子代大鼠海馬MR、GR表達(dá)量的變化；（5）每組隨機(jī)抽取20只子代大鼠，采用地塞米松抑制實(shí)驗(yàn)研究宮內(nèi)感染對(duì)子代大鼠HPA軸調(diào)節(jié)功能的影響。
　　結(jié)果：（1）神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果示：曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組子代大鼠的水平移動(dòng)格數(shù)及后肢站立次數(shù)均較正常對(duì)照組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.227，2.189，P均<0.05）；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，定位航行實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組子代大鼠的逃避潛伏期隨訓(xùn)練天數(shù)的增加均呈逐漸縮短的趨勢(shì)

5、，兩組間總體差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=15.487，P<0.01），且于第3天開始，實(shí)驗(yàn)組的逃避潛伏期長(zhǎng)于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（d1：F=13.995，P<0.01；d2：F=4.911，P<0.05；d3：F=13.232， P<0.01），空間探索實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組子代大鼠在目標(biāo)象限停留的時(shí)間及穿越原平臺(tái)所在位置的次數(shù)均少于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（時(shí)間：t=4.575，P<0.01；次數(shù)：t=2.230，P<0.05）。

6、（2）HE染色結(jié)果示：正常對(duì)照組子代大鼠海馬各區(qū)神經(jīng)元排列均勻整齊，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，核仁明顯，染色質(zhì)均勻；實(shí)驗(yàn)組子代大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列雜亂，多處可見細(xì)胞核固縮、碎裂、溶解現(xiàn)象，CA3區(qū)神經(jīng)元排列均勻整齊，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，核仁明顯，染色質(zhì)均勻，DG區(qū)細(xì)胞排列稀疏、雜亂，部分細(xì)胞核固縮、溶解。（3）免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果示：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組子代大鼠海馬以上各區(qū)均有MR、GR表達(dá)，且均在CA1區(qū)表達(dá)較多；MR、GR在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)

7、中均有表達(dá)，其中MR以細(xì)胞質(zhì)為主，GR以細(xì)胞核為主；海馬CA1區(qū)，實(shí)驗(yàn)組子代大鼠MR和GR的平均光密度值均較正常對(duì)照組減低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.470，2.398，P均<0.05），而兩組間MR/GR比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；海馬CA3區(qū)，實(shí)驗(yàn)組子代大鼠MR、GR平均光密度值及MR/GR比值與正常對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；海馬DG區(qū)，實(shí)驗(yàn)組子代大鼠MR平均光密度值與正常對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，實(shí)驗(yàn)組GR平均光密度值較正常對(duì)照組增加，差異有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義（t=-3.720，P<0.01），實(shí)驗(yàn)組MR/GR比值較正常對(duì)照組減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.151，P<0.05）。（4）蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果示：實(shí)驗(yàn)組MR相對(duì)表達(dá)量于海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)均較正常對(duì)照組減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ CA1：t=7.561, P<0.01；CA3：t=3.092，P<0.05），于海馬DG區(qū)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)驗(yàn)組GR相對(duì)表達(dá)量于CA1區(qū)較正常對(duì)照組減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.

9、238， P<0.01），于海馬CA3區(qū)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，于海馬DG區(qū)較對(duì)照組增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-6.470，P<0.01）。（5）地塞米松抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果示：子代大鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水后的血清皮質(zhì)酮水平（視為基礎(chǔ)血清皮質(zhì)酮水平）及注射地塞米松后的血清皮質(zhì)酮水平，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；實(shí)驗(yàn)組子代大鼠腹腔內(nèi)注射地塞米松后的血清皮質(zhì)酮水平較應(yīng)用生理鹽水的血清皮質(zhì)酮水平減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.092，P<0.

10、01），對(duì)照組的亦減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.343，P<0.01），說(shuō)明地塞米松對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組子代大鼠的HPA軸均產(chǎn)生抑制作用，兩組子代大鼠的HPA軸功能正常。
　　結(jié)論：LPS介導(dǎo)的宮內(nèi)感染可引起子代對(duì)新環(huán)境的探索能力減退、空間學(xué)習(xí)記憶能力受損；其海馬各區(qū)病理學(xué)改變程度不一，于CA1區(qū)最為嚴(yán)重，其次為DG區(qū)，CA3區(qū)未見明顯異常；MR于海馬CA1、CA3區(qū)較正常對(duì)照組表達(dá)減少，GR于CA1區(qū)表達(dá)量較正常對(duì)照組減少，而于