TAP2基因多態(tài)性在免疫介導(dǎo)性腎病中的初步研究.pdf

1、抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運子-2(Transpoter associated with antigen processing-，TAP2)屬于ATP結(jié)合盒(ATP-binding cassette)的B亞族，是自身免疫性疾病的重要候選基因，與TAP1共同組成TAP復(fù)合體，參與抗原肽的加工和呈遞的過程，這一過程包括在TAP復(fù)合體作用下將抗原肽裝載于細胞表面的MHCⅠ類分子上，再經(jīng)MHCⅠ類分子呈遞給CD8<'+>細胞毒性T淋巴細胞(CTL)，其中抗

2、原肽來源于內(nèi)源性蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶體裂解作用產(chǎn)生。TAP2的作用是抗原加工過程的樞紐，其基因顯著性變異可導(dǎo)致MHC Ⅰ類分子表達明顯下降。TAP2基因具有多態(tài)性，大量的實驗研究證明，TAP基因變異與病毒感染性疾病、腫瘤、自身免疫性疾病、遺傳性疾病有關(guān)；研究證明多種細胞因子例如IFN-γ和IL-10等都可調(diào)節(jié)TAP2的表達。由于TAP2蛋白直接接觸抗原肽，因此，存在這樣一個可能：TAP2編碼的多態(tài)性決定抗原選擇性，這可補充HLA分子的功能。這

3、一可能性與非同義單核苷酸多態(tài)性(non-synonymous single nucleotide polymorphism，nsSNPS)的明顯過量是相一致的(4個高頻率的nsSNPS，其中Gly687Ter編碼終止密碼子，截去C末端的17個氨基酸)，像HLA一樣，編碼TAP2多態(tài)性的過?？赡芊从沉死趯π鲁霈F(xiàn)的病原體的雜和性和特異性較強的且近期的正向選擇。大鼠試驗已經(jīng)證明了TAP2多態(tài)性可以決定抗原肽的選擇性；在人類也有其多態(tài)性可能決

4、定抗原肽選擇性的假說，但是此假設(shè)目前并尚未得到證實。一個最近的研究表明，通過參與基因選擇剪接的機制，遺傳多態(tài)性影響TAP2基因的表達。目前國內(nèi)外尚未見有TAP2 rs241441在腎臟免疫介導(dǎo)性疾病中功能性變異的研究。 目的： 研究TAP2基因的彩態(tài)性與免疫介導(dǎo)性腎臟病問的關(guān)系，以及外周血中TAP2基因表達的遺傳調(diào)控。 方法： 1、收集患有免疫介導(dǎo)性腎病病人54例，以從TaqMan SNP Genotyp

5、ingAssays database中公布的45例中國漢族健康人的TAP2等位基因分布情況作為對照。 2、收集病例組的腎臟活組織檢查的結(jié)果及外周血5毫升。 3、提取外周血液標(biāo)本的基因組DNA和RNA。 4、以同義的G/A SNP at 604 Gly(rs241441)作為遺傳標(biāo)志，利用PCR多聚酶鏈反應(yīng)方法對每個病人的TAP2的基因型進行分型。 5、對TAP2基因型為雜合子的標(biāo)本對TAP2 mRNA轉(zhuǎn)錄

6、本NM 000544采用RT-PCR的方法，觀測其表達情況。 6、統(tǒng)計學(xué)方法：本實驗采用病例對照研究的方法，對病例組進行Hardy-Weinberg equilibrium(哈蒂．溫伯格平衡)檢測，對TAP2 rs241441等位基因在本實驗病例組中分布情況，采用X<'2>檢驗方法進行分析。 7、分析臨床資料。 結(jié)果： 通過對本實驗的54例天津漢族的免疫介導(dǎo)性腎病病人與TaqMan SNPGenotypi

7、ng Assays database中公布的45例中國漢族健康對照的TAP2 rs241441進行Hardy-Weinberg equilibrium test的)X<'2>檢驗發(fā)現(xiàn)X<'2>=11.78(p=0.0006<0.05)，存在著顯著的遺傳不平衡現(xiàn)象；54個病例中TAP2的基因型分別為：10個C/C型，12個C/T型，32個T/T型，與45例中國漢族健康對照通過X<'2>檢驗，X<'2>=1.39(P=0.2382>0.05

8、)結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義，但病例組中C等位基因的頻率為30％，明顯高于對照組的22％；對TAP2基因型為雜合子的RNA進行RT-PCR的8個結(jié)果分析表明：5個樣本為AT>GC的表達方式，2個樣本為AT=GC的表達方式，1個樣本為AT