TAP基因多態(tài)性與變應(yīng)性鼻炎相關(guān)性研究.pdf

1、目的：對(duì)變應(yīng)性鼻炎（AR）患者和正常人的抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（TAP）的TAP1333和TAP1637位點(diǎn)進(jìn)行基因及等位基因分型，探討該基因位點(diǎn)多態(tài)性與變應(yīng)性鼻炎遺傳易感性之間的關(guān)系。
　　 方法：①特異性IgE的檢測(cè)。各抽取AR組和對(duì)照組研究對(duì)象新鮮血液2ml，離心后吸取上層血清。應(yīng)用阿羅格AD體外診斷盒對(duì)血清進(jìn)行特異性變應(yīng)原（9項(xiàng)）的檢測(cè)。根據(jù)試紙顯色深淺判定陽(yáng)性結(jié)果的強(qiáng)弱程度，分別以+，++，+++表示。②外周血DNA的提

2、取。各抽取AR組和對(duì)照組研究對(duì)象新鮮抗凝血液2ml，用淋巴細(xì)胞分離液提取白細(xì)胞后，應(yīng)用血液基因組DNA提取試劑盒提取出DNA，-20℃進(jìn)行保存。應(yīng)用紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA樣本的純度和濃度，記錄260nm、280nm波長(zhǎng)時(shí)的OD值。③引物合成。根據(jù)TAP1333和TAP1637位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)四條引物，包括一對(duì)共同引物和兩條特異引物。引物設(shè)計(jì)參照文獻(xiàn)Powis et al.[4]④ARMS-PCR擴(kuò)增。根據(jù)TAP1333和TAP1637位點(diǎn)

3、等位基因型不同分別設(shè)計(jì)三組引物，每個(gè)研究對(duì)象需加A、B、C三管含不同引物對(duì)的反應(yīng)體系，其每管的擴(kuò)增產(chǎn)物代表同一研究對(duì)象的DNA在不同引物對(duì)作用下延伸的產(chǎn)物。⑤瓊脂糖凝膠電泳。將同一樣本在不同引物擴(kuò)增下得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物混合后進(jìn)行水平電泳，完畢取出瓊脂糖凝膠，紫外分析燈下分析結(jié)果。⑥統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)算TAP基因的等位基因頻率、基因型頻率分布，分析基因多態(tài)性與疾病的相關(guān)性，組間比較用x2檢驗(yàn)，P>0.05有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.特異性IgE檢測(cè)結(jié)果：特異性變應(yīng)原分布情況檢測(cè)結(jié)果顯示屋塵螨檢測(cè)陽(yáng)性率位于首位（86.67％），其次為花粉類和動(dòng)物上皮。
　　 2.DNA濃度及純度檢測(cè)結(jié)果：65例研究對(duì)象外周血DNA稀釋后在紫外分光光度計(jì)下測(cè)定的OD260/OD280比值在1.5～2.0之間。部分樣本可能存在RNA或蛋白質(zhì)污染，但不影響PCR擴(kuò)增結(jié)果。
　　 3.ARMS-PCR結(jié)果：TAP1333位

5、點(diǎn)檢測(cè)出三種基因型，分別為Ile/Ile、Ile/Val、Val/Val。A、B、C三管擴(kuò)增產(chǎn)物大小分別為533bp，351bp和241bp。TAP1637位點(diǎn)檢測(cè)出兩種基因型，分別為Asp/Asp和Asp/Gly，A、B、C三管擴(kuò)增產(chǎn)物大小分別為429bp，180bp，和307bp，在兩組研究對(duì)象中均未檢測(cè)出Gly/G1y基因型。
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果：TAP1333和TAP1637位點(diǎn)基因型的分布頻率在AR組及對(duì)照組中都分別

6、以Ⅱ和DD為主，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，前者差異有顯著性（P<0.05），后者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；TAP1333和TAP1637位點(diǎn)等位基因型的分布頻率在AR組及對(duì)照組中都分別以I和D為主，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，前者差異有顯著性（P<0.05）；后者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：TAP1333基因型和等位基因型頻率的分布在正常人和AR患者中不同，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明此位點(diǎn)基因多態(tài)性與AR具有一定相關(guān)性，屬于AR易感基因群