尾加壓素Ⅱ在低氧性肺動(dòng)脈高壓中基因表達(dá)、合成、釋放及意義的基礎(chǔ)和臨床研究.pdf

1、低氧性肺動(dòng)脈高壓(hypoxicpulmonaryhypertension，HPH)的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全闡明，研究表明血管活性物質(zhì)在肺血管張力調(diào)節(jié)和HPH發(fā)病機(jī)制中具有十分重要的作用。隨著對血管活性肽的逐一發(fā)現(xiàn)和認(rèn)識(shí)，HPH的發(fā)病機(jī)制亦不斷被深化和揭示，尋找新的血管活性物質(zhì)并探討其在低氧性肺血管收縮和結(jié)構(gòu)改建中的作用和機(jī)制始終是該領(lǐng)域的研究重點(diǎn)之一。國外學(xué)者最新研究發(fā)現(xiàn)，自然界存在一種新型血管活性肽—尾加壓素H(urotensinⅡ，

2、UⅡ)，其縮血管作用比內(nèi)皮素還要強(qiáng)大16倍之多。UⅡ最初是從魚脊索中分離出來的，1998年被發(fā)現(xiàn)在靈長類、人體內(nèi)的中樞神經(jīng)、心血管、肺等組織中亦能克隆出編碼人UⅡ前體的cDNA。初步研究認(rèn)為：UⅡ?qū)θ撕褪笾鞣蝿?dòng)脈均有收縮作用，對支氣管亦有收縮作用，提示UⅡ可能對肺通氣和肺循環(huán)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。但有關(guān)UⅡ在低氧性肺血管收縮和血管重構(gòu)的基因表達(dá)、合成與釋放的研究國內(nèi)外尚未見報(bào)道。腎上腺髓質(zhì)素(adrenomedullin，ADM)亦是近年來發(fā)現(xiàn)

3、的一種新型血管活性肽，研究證明ADM具有擴(kuò)張血管，降低血壓，抑制血管平滑肌遷移、增殖，抑制縮血管因子的合成與釋放等多種生理作用，因而對人體是一種極為重要的保護(hù)因子。目前有關(guān)ADM和UⅡ在HPH病理生理過程中相互關(guān)系的研究尚少。 目的1.通過動(dòng)態(tài)觀察COPD患者不同病期的血漿UⅡ和ADM含量，從人體水平探討低氧對UⅡ合成和釋放的影響，以及UⅡ和動(dòng)脈血氧分壓(PaO2)、肺動(dòng)脈壓力(PAP)、ADM的關(guān)系；2.建立HPH大鼠模型，觀

4、察不同低氧時(shí)相大鼠血漿、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中UⅡ和ADM含量的動(dòng)態(tài)變化，從整體動(dòng)物水平探討低氧對UⅡ合成和釋放的影響，以及UⅡ和ADM在HPH中的相互關(guān)系及其意義；3.通過觀察大鼠肺組織UⅡmRNA的表達(dá)及UⅡ蛋白的分布，從分子水平探討低氧對UⅡ基因表達(dá)、合成的影響，從而為揭示UⅡ在HPH中的病理生理作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為進(jìn)一步研究HPH發(fā)病機(jī)制開拓新思路，并將為防治COPD、肺心病提供新的策略。 方法1.采用放射免疫法

5、(RIA)檢測COPD患者急性加重期和穩(wěn)定期血漿UⅡ和ADM的含量，分析UⅡ與ADM、肺動(dòng)脈壓力(PAP)和動(dòng)脈血氧分壓(PaO2)的關(guān)系；2.制備HPH大鼠模型，利用右心導(dǎo)管法測定實(shí)驗(yàn)大鼠平均肺動(dòng)脈壓力(mPAP)和右心室收縮最大上升速率(RVdp/dtmax)，光鏡和電鏡觀察低氧后肺組織病理形態(tài)學(xué)的變化；3.采用RIA檢測低氧不同時(shí)相大鼠血漿、BALF中UⅡ和ADM含量的變化，分析UⅡ與ADM、mPAP和PaO2的關(guān)系；4.采用反轉(zhuǎn)

6、錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)、免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測低氧不同時(shí)相大鼠肺組織中UⅡmRNA的表達(dá)和UⅡ蛋白的分布。 結(jié)果1.與健康對照組比較，COPD患者急性加重期和穩(wěn)定期血漿UⅡ和ADM含量均增高(P＜0.01)，急性加重期高于穩(wěn)定期(P＜0.05)；急性加重期血漿UⅡ含量與PaO2呈負(fù)相關(guān)(r=-0.788，P＜0.001)，與PAP和ADM含量均呈正相關(guān)(r=0.723，r=0.612，P＜0.001)。2.低氧

7、各組大鼠mPAP和RVdp/dtmax均高于對照組(P＜0.01)，PaO2低于對照組(P＜0.01)；低氧各組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)破壞增生，肺血管構(gòu)型重建。3.與對照組比較，低氧各組大鼠血漿和BALF中UⅡ含量升高，低氧20d達(dá)高峰(P＜0.001)，30d時(shí)呈下降趨勢，但仍高于對照組(P＜0.05)；血漿和BALF中ADM含量亦明顯升高(P＜0.01，P＜0.001)；低氧20d時(shí)血漿UⅡ與mPAP呈正相關(guān)(r=0.722，P＜0.01)

8、，與PaO2呈負(fù)相關(guān)(r=-0.721，P＜0.01)；血漿和BALF中UⅡ含量和ADM含量均呈正相關(guān)(r=0.846；r=0.942，P＜0.05)。4.UⅡ在實(shí)驗(yàn)各組大鼠肺組織多種細(xì)胞中廣泛分布，低氧組肺組織UⅡ蛋白表達(dá)增強(qiáng)。5.大鼠肺組織中可檢測到UⅡmRNA；隨低氧時(shí)間的延長UⅡmRNA表達(dá)量增加，低氧20d和30d表達(dá)量明顯高于對照組(P＜0.05)。 結(jié)論1、COPD患者急性加重期和穩(wěn)定期血漿UⅡ含量明顯高于健康對照

9、組，且急性加重期高于穩(wěn)定期。2、COPD患者血漿UⅡ含量與PaO2呈負(fù)相關(guān)，與PAP及血漿ADM含量呈正相關(guān)。3、UⅡ在大鼠肺組織中廣泛分布，低氧通過調(diào)控基因表達(dá)而促進(jìn)肺組織UⅡ蛋白合成。4、低氧各組大鼠血漿和BALF中UⅡ含量明顯升高，血漿UⅡ含量與PaO2呈負(fù)相關(guān)，與mPAP及血漿ADM含量呈正相關(guān)。5、血漿UⅡ含量在HPH大鼠與COPD患者中的變化趨勢相一致。 研究結(jié)果提示：(1)UⅡ既是循環(huán)激素，又以自分泌和/或旁分泌形