p53在慢性低壓低氧性肺動脈高壓形成中的作用.pdf

1、本研究采用動物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞培養(yǎng)相結(jié)合的方法，復(fù)制低氧性肺動脈高壓(hypoxicpulmonaryhypertension，HPH)的動物模型和PASMCs增殖模型，同時應(yīng)用免疫熒光組織化學(xué)法、流式細(xì)胞術(shù)、Western-blot、RT-PCR等成熟的分子生物學(xué)方法和細(xì)胞凋亡檢測法，檢測HPH時mtp53分子表達(dá)及蛋白含量變化，觀測PASMCs的增殖和凋亡變化，觀察mtp53與PASMCs增殖、凋亡的關(guān)系。用放射免疫法觀察CGRP在慢性H

2、PH中的動態(tài)表達(dá)變化，探索其對肺動脈高壓的治療作用。 本研究觀測到：在低壓、低氧性慢性PAH大鼠的肺小動脈壁細(xì)胞增殖的過程中，細(xì)胞凋亡也顯著增加，并且凋亡細(xì)胞數(shù)隨低氧時間延長而增加。因此推論，在慢性HPH時，在VSMCs增殖活性升高的同時，細(xì)胞凋亡也有所增強(qiáng)，其生理意義在于試圖從整體上維持平滑肌細(xì)胞數(shù)目的動態(tài)平衡。在用低氧刺激離體培養(yǎng)的PASMCs時，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖顯著增加，但細(xì)胞凋亡無明顯變化，說明離體狀態(tài)下，低氧誘導(dǎo)的PASM

3、Cs增殖的過程不伴有細(xì)胞凋亡的改變。整體水平和離體細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異，提示低氧時整體水平PASMCs凋亡增加是神經(jīng)、體液因素作用的結(jié)果，而非低氧的直接結(jié)果?？傊琍ASMCs異常增殖大于凋亡可能是HPH形成過程中發(fā)生肺血管重塑的主要原因之一。 mtp53在慢性HPH大鼠肺組織中和離體培養(yǎng)的大鼠PASMCs中都有少量表達(dá)，低氧刺激可使其表達(dá)顯著增高，且其表達(dá)從蛋白的轉(zhuǎn)錄水平即開始增加。凋亡相關(guān)基因bcl-2表達(dá)則無明顯變化。提

4、示mtp53有可能參與了慢性低壓、低氧性PAH形成過程中的肺小血管結(jié)構(gòu)重建的調(diào)控。CGRP對常氧條件下培養(yǎng)的PASMCs無明顯作用，對低氧條件下培養(yǎng)的大鼠PASMCs的增殖有一定的抑制作用，對PASMCs的凋亡則無任何影響。 以上結(jié)果提示：低氧可以誘導(dǎo)PASMCs發(fā)生增殖反應(yīng)，但不能直接誘導(dǎo)PASMCs凋亡增加。低氧條件下PASMCs的增殖/凋亡失衡可能是PAH和肺小血管重建的原因之一。低氧可以誘導(dǎo)mtp53表達(dá)增多，后者可能是