間歇性低氧肺動(dòng)脈高壓大鼠apelin-APJ系統(tǒng)的變化及意義.pdf

1、目的：通過(guò)研究間歇性低氧肺動(dòng)脈高壓大鼠血漿、肺、右心室組織apelin-36和其受體APJ蛋白水平、基因表達(dá)及其在組織分布情況,探討apelin-APJ系統(tǒng)在間歇性低氧所致的肺動(dòng)脈高壓病理過(guò)程中的變化及其可能起的作用和意義. 方法：(1)間歇性低氧肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型的復(fù)制:清潔級(jí)雄性SD大鼠50只,隨機(jī)分成5組(n=10),即:正常對(duì)照組(C)、正常空氣艙對(duì)照2周組(2C)、正?？諝馀搶?duì)照4周組(4C)、間歇性低氧艙2周組(2

2、H)和間歇性低氧艙4周組(4H).間歇性低氧艙內(nèi),實(shí)驗(yàn)期間向艙內(nèi)循環(huán)充入氮?dú)夂脱鯕?每次循環(huán)為90s,艙內(nèi)最高氧濃度維持在21﹪左右,最低氧濃度維持在9±1.5﹪.正?？諝馀搶?duì)照組置于間歇低氧艙相似的艙內(nèi),持續(xù)通入空氣,使0<,2>濃度21﹪左右.正?？諝馀搶?duì)照組和間歇低氧艙組艙內(nèi)飼養(yǎng)每天8h,每周6天.正常對(duì)照組大鼠置于室內(nèi),其他飼養(yǎng)條件與正常空氣艙對(duì)照組及間歇低氧艙組相同.動(dòng)物飼養(yǎng)到規(guī)定時(shí)間后,戊巴比妥鈉(3.5mg/kg,i.p.

3、)麻醉,右心導(dǎo)管法測(cè)量平均肺動(dòng)脈壓(mPAP),右心室收縮末期壓及右心室室內(nèi)壓最大變化速率,左頸總動(dòng)脈插管測(cè)平均頸動(dòng)脈壓(mCAP),分別稱取右心室游離壁(RV)和左心室加室間隔(LV+S)重量.以mPAP、mCAP和RV/(LV+S)作為模型建立與否的判斷指標(biāo). (2)放射免疫(RIA)法測(cè)定血漿、右心室和肺組織勻漿apelin-36的蛋白含量. (3)逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)半定量檢測(cè)右心室和肺組織ape

4、lin-36mRNA及APJ mRNA基因水平. (4)免疫組織化學(xué)方法,半定量并定位檢測(cè)心肺組織中apelin-36及APJ的含量及組織內(nèi)分布. 結(jié)果： (1)間歇性低氧肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的檢測(cè):mPAP:2H組較2C組高18.71﹪(P<0.05),4H組較4C組高16.87﹪(P<0.05).RV+dp/dt:4H組較2H組高80.97﹪(P<0.01),較4C組高56.35﹪(P<0.01).RV-dp/

5、dt:4H組較2H組高88.85﹪(Jp<0.01),較4C組高55.43﹪(P<0.01).RVSP:4H組較2H組高19.49﹪(P<0.01),較4C組高36.36﹪(P<0.01).RV/(LV+S):4H組與2H組、4C組均無(wú)顯著性差異,(P>0.05),各組間mCAP及(LV+S)/WT均無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05). (2)RIA結(jié)果:各組間血漿及右心室組織勻漿apelin-36蛋白含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0

6、.05),肺組織勻漿apelin-36含量4H組較C組高84﹪(P<0.05),較2H組高144﹪(P<0.01). (3)RT-PCR結(jié)果:肺組織中,apelin-36 mRNA:4H組較C組低14﹪(P<0.05)、較2H組低21﹪(P<0.01).APJ mRNA:2H組較C組高31.25﹪(P<0.05),4H組較C組高39.58﹪(P<0.05).右心室組織apelin-36 mRNA:各組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.0

7、5).APJ mRNA:4H組較C組高78.72﹪(P<0.01),4H組較2H組高68.67﹪(P<0.05). (4)免疫組化結(jié)果:肺組織中apelin-36及APJ主要分布于肺血管內(nèi)外膜,且間歇低氧4周時(shí)肺血管外膜表達(dá)最為明顯,血管平滑肌細(xì)胞較少分布,各級(jí)支氣管上皮細(xì)胞分布較多.4H組Apelin-36含量較C組高24.86﹪(P<0.05),較2H組高30.32﹪(P<0.01),APJ在2H組較C組高40.98﹪(P<

8、0.05),而4H組較C組高61.30﹪(P<0.05).右心室組織免疫組化結(jié)果顯示,Apelin-36和APJ主要分布于心肌細(xì)胞,且在橫切面見(jiàn)分布于胞漿內(nèi),縱切面呈與平滑肌細(xì)胞膜垂直分布的細(xì)小條紋狀,而在心肌血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管平滑肌細(xì)胞呈低水平分布.Apelin-36:各組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),APJ:2H組較C組高25.26﹪(P<0.05),4H組較C組高67.82﹪(P<0.05). 結(jié)論： 間歇性低

9、氧能使大鼠肺動(dòng)脈壓力升高,該模型可以部分復(fù)制臨床SAHS引起肺動(dòng)脈高壓的發(fā)病過(guò)程;間歇性低氧所導(dǎo)致的肺動(dòng)脈高壓較持續(xù)缺氧肺動(dòng)脈高壓,程度較輕,對(duì)右心室結(jié)構(gòu)影響較小;間歇性低氧形成肺動(dòng)脈高壓過(guò)程中,機(jī)體肺組織apelin蛋白合成增加,右心室組織APJ受體表達(dá)增多,提示apelin-APJ系統(tǒng)的蛋白合成、基因表達(dá)及其代謝可能參與了間歇性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生發(fā)展;Apelin-APJ在間歇性低氧肺動(dòng)脈高壓模型中對(duì)機(jī)體保護(hù)作用、肺血管外膜apeli