16SrRNA檢測在螺桿菌感染與肝癌相關(guān)性研究中的應(yīng)用.pdf

1、目的 采用分子生物學(xué)技術(shù),從分子水平上通過檢測螺桿菌16SrRNA基因,探討螺桿菌感染與原發(fā)性肝癌(HCC)之間的相關(guān)性,為原發(fā)性肝癌病因和發(fā)病機(jī)制提供新的思路,同時對原發(fā)性肝癌的臨床診斷和防治開辟新的途徑.方法①從Genebank基因文庫中下載已知所有螺桿菌屬16SrRNA序列,利用DNAstar軟件包與大腸埃希菌、溶血鏈球菌和嗜肺巴氏菌的16SrRNA的高保守區(qū)序列比較,優(yōu)化并設(shè)計出一對屬特異螺桿菌共用引物、反應(yīng)參數(shù)和一個屬特異螺桿

2、菌DNA探針,分別用于PCR擴(kuò)增和Southern雜交確認(rèn).②選擇術(shù)后原發(fā)性肝癌組織15例為實驗組;胃癌、非原發(fā)性肝癌、結(jié)直腸癌和子宮肌瘤各15例為對照組.原發(fā)性肝癌組和胃癌組癌組織塊一部分制成勻漿提取DNA,用于PCR和Southern實驗,另一部分和其它對照組制作病理切片用于原位雜交實驗.③合成Battle設(shè)計的肝螺桿菌(Hh)、幽門螺桿菌(Hp)、H.Fennelliae (Hf)16SrRNA-cDNA特異探針和該室設(shè)計的屬特異

3、螺桿菌16SrRNA-cDNA共用探針,利用地高辛3'-末端標(biāo)記法標(biāo)記探針,檢測各組切片標(biāo)本16SrRNA-mRNA的表達(dá).④對經(jīng)PCR擴(kuò)增、Southern雜交和原位雜交確認(rèn)的原發(fā)性肝癌組陽性標(biāo)本DNA進(jìn)行序列測定,以驗證螺桿菌感染類型.結(jié)論 ①經(jīng)PCR擴(kuò)增和Southern雜交確認(rèn)結(jié)果顯示,在原發(fā)性肝癌和胃癌組織中均檢出16SrRNA基因,表明兩種腫瘤可能均伴有螺桿菌感染.②原位雜交法檢測16SrRNA-mRNA表達(dá)和16SrRNA