表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑AG1478對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制劑Tyrphostin AG1478對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響,觀察AG1478對(duì)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞化學(xué)治療敏感性的影響,并探討AG1478對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為影響的相關(guān)機(jī)制,為AG1478作為一種新的腫瘤治療藥物在控制人膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移和化學(xué)治療增敏的應(yīng)用上提供

2、實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法:(1)應(yīng)用MTT(噻唑藍(lán))比色法檢測(cè)不同濃度AG1478和AG1478聯(lián)合CDDP作用于體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞24h和48h后的細(xì)胞生存率。(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度AG1478和AG1478聯(lián)合CDDP作用于體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞24h和48h后細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡的影響。(3)Transwell小室體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AG1478對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞體外侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。(

3、4)明膠酶譜法檢測(cè)AG1478對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)水平的影響;(5)Western印跡法檢測(cè)CDDP和AG1478對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞EGFR信號(hào)通路分子蛋白(EGFR/p-EGFR、AKT/p-AKT、ERK/p-ERK)以及細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:(1)AG1478明顯抑制體外培養(yǎng)的人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞增殖,并呈時(shí)間和濃度依賴性,并可以阻斷EGF促進(jìn)人膠質(zhì)瘤

4、 U87細(xì)胞增殖的作用。(2)AG1478可以誘導(dǎo)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞發(fā)生凋亡;阻滯細(xì)胞于G0-G1期,呈濃度依賴性。(3)AG1478可以抑制人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞體外侵襲和遷移能力。(4)AG1478抑制人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞p-EGFR/EGFR、p-AKT/AKT、p-ERK/ERK、MMP-2、MMP-9和CyclinD1蛋白的表達(dá)。(5)CDDP具有EGF促進(jìn)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞EGFR、ERK和AKT蛋白磷酸化的作用,AG1478可以

5、阻斷EGF和CDDP對(duì)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞EGFR信號(hào)通路分子活化的作用。(6)AG1478通過(guò)增加S期細(xì)胞數(shù)和抑制CDDP活化人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞EGFR信號(hào)通路活化而增強(qiáng)CDDP對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。
　　結(jié)論:AG1478通過(guò)誘導(dǎo)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞凋亡,阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程,阻斷細(xì)胞EGFR信號(hào)傳導(dǎo)通路、下調(diào)MMP-2、MMP-9和CyclinD1蛋白的表達(dá)來(lái)抑制體外人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力,AG1478還增強(qiáng)人