反義表皮生長(zhǎng)因子受體對(duì)人肺癌細(xì)胞系放射敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察antisenseEGFR對(duì)肺腺癌細(xì)胞系的生長(zhǎng)作用和放療增敏作用，為臨床開(kāi)展放射治療聯(lián)合基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：用免疫組化法檢測(cè)EGFR高表達(dá)的肺腺癌細(xì)胞系spc-a-1。擴(kuò)增并提取pcDNA3-antisenseEGFR質(zhì)粒和pcDNA3空質(zhì)粒，在脂質(zhì)體介導(dǎo)下用質(zhì)粒pcDNA3-antisenseEGFR轉(zhuǎn)染spc-a-1細(xì)胞，并以空質(zhì)粒pcDNA3轉(zhuǎn)染spc-a-1細(xì)胞做對(duì)照。用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞克隆

2、，以RT-PCR和Westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后EGFR的mRNA及蛋白表達(dá)抑制情況，流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞周期的變化，繪制生長(zhǎng)曲線，評(píng)價(jià)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。然后分為五個(gè)實(shí)驗(yàn)組：未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(正常細(xì)胞組)，單純放療組，單純pcDNA3-antisenseEGFR轉(zhuǎn)染組，空質(zhì)粒pcDNA3轉(zhuǎn)染+放療組，pcDNA3-antisenseEGFR轉(zhuǎn)染+放療組。給予6MVX射線，800cGy劑量照射，48h后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，生長(zhǎng)曲線

3、檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。 結(jié)果：轉(zhuǎn)染pcDNA3-antisenseEGFR組與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組、空載體轉(zhuǎn)染組比較，EGFRmRNA和蛋白表達(dá)量明顯減少，細(xì)胞生長(zhǎng)延遲，細(xì)胞周期阻滯在G2、M期，S期細(xì)胞減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，而正常細(xì)胞組和空載體轉(zhuǎn)染組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。轉(zhuǎn)染pcDNA3-antisenseEGFR+放療組與未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(正常細(xì)胞組)、單純放療組、單純pcDNA3-antisenseEGFR轉(zhuǎn)染組、