腦出血大鼠腦組織、血漿MDA、NF-κB、TNF-α含量變化及依達(dá)拉奉的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、背景與目的 腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是指原發(fā)性腦實(shí)質(zhì)內(nèi)出血，發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高，嚴(yán)重威脅人類的生命和健康。腦出血后血腫周圍組織水腫和神經(jīng)元損傷是影響腦出血患者病情程度及預(yù)后的重要因素。然而目前對腦出血尚無確切有效的治療方法。其主要原因是對其病理生理機(jī)制認(rèn)識(shí)尚不完全清楚。研究發(fā)現(xiàn)腦出血后血腫周圍也存在一個(gè)類似于缺血性腦卒中的“半暗帶”組織，“半暗帶”組織中存在著復(fù)雜的病理生理變化

2、，這種變化是多重因素共同參與的復(fù)雜的過程。進(jìn)一步研究腦出血后血腫周圍組織的病理生理機(jī)制并進(jìn)行干預(yù)，對減少患者的功能損害、改善臨床預(yù)后有重要意義。自由基及其相關(guān)的炎性機(jī)制在這些損害中的作用愈來愈受到重視。自由基清除劑MCI-186(3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，依達(dá)拉奉)作為新開發(fā)的一種抗氧化劑已廣泛用于治療急性腦梗死，療效顯著。但其對出血性腦損傷是否具有治療作用尚不清楚。本研究通過觀察自由基和炎性反應(yīng)在腦出血后腦損傷中的作用，

3、以及依達(dá)拉奉對腦出血是否具有治療效果，探討其可能的機(jī)制，為腦出血后腦損傷的病理生理機(jī)制研究及臨床治療提供理論依據(jù)。 材料和方法 1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：Sprague-Dawley實(shí)驗(yàn)大鼠120只，雌雄各半，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組(control group)、腦出血組(ICH group)和治療組(Therapy group)，每組40只。每組按不同的時(shí)相點(diǎn)又分為4個(gè)亞組，每個(gè)亞組10只。其中5只用于腦含水量和病理學(xué)檢測

4、，另外5只用于MDA、TNF-α、NF-кB檢測。各組大鼠在取腦前從下腔靜脈采集血標(biāo)本，檢測血漿中相應(yīng)的指標(biāo)。 2．ICH動(dòng)物模型：采用立體定向自體血注入法。沿正中線切開頭部皮膚，暴露顱骨和Bregma點(diǎn)(前囟)。于前囟前0.2mm，中線右側(cè)旁開3mm處垂直進(jìn)針6mm到達(dá)尾狀核，分兩次注入50ul自體血。 3.對照組大鼠操作步驟同ICH組，但不注血。治療組大鼠分別于造模前30min及造模后1次/12h腹腔注射依達(dá)拉奉(3

5、mg/Kg)；ICH組和對照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。 4．神經(jīng)功能缺損評分：參照Longa(1989)標(biāo)準(zhǔn)。 5．腦含水量檢測：采用干濕重法。計(jì)算公式：腦含水量=(濕重-干重)/濕重×100％。 6．MDA檢測：采用硫代巴比妥酸法，單位：nmol/mgprot。 7．TNF-α檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法，單位：ng/ml。 8．NF-кB檢測：采用電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)

6、法，單位：DU。 9．病理學(xué)分析：采用蘇木精-伊紅染色(HE)，光鏡下觀察。 10．統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析及相關(guān)檢驗(yàn)。 結(jié)果 1．神經(jīng)功能缺損評分：腦出血組大鼠各時(shí)相點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評分明顯高于對照組；治療組大鼠各時(shí)相點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評分均顯著低于腦出血組(P<0.05)。 2．腦含水量檢測：腦出血組大鼠6h、24h、72h腦含水量較對照組顯著增高(P<0.05)

7、，168h差異不顯著(P>0.05)；與腦出血組相比，治療組大鼠6h、24h、72h腦含水量顯著降低(P<0.05)，168h差異不顯著(P>0.05)。 3．腦勻漿MDA、TNF-α含量檢測：腦出血組大鼠各個(gè)時(shí)相點(diǎn)腦勻漿 MDA、TNF-α含量較對照組顯著升高(P<0.05)；與腦出血組相比，治療組大鼠腦勻漿MDA、TNF-α含量顯著降低(P<0.05)。 4．相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果：腦出血組和治療組大鼠腦含水量與腦勻漿TNF

8、-α含量呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R<'2>=0.934，p<0.01。 5．腦組織NF-кB活性檢測：腦出血組大鼠各個(gè)時(shí)相點(diǎn)腦組織NF-кB活性較對照組非常顯著增高(p<0.01)；與腦出血組相比，治療組大鼠各個(gè)時(shí)相點(diǎn)腦組織NF-кB活性非常顯著降低(p<0.01)。 6．血漿MDA、TNF-α含量檢測：腦出血組各個(gè)時(shí)相點(diǎn)血漿MDA、TNF-α含量較對照組均非常顯著增高(p<0.01)；與腦出血組相比，治療組大鼠血漿MDA

9、、TNF-α含量非常顯著降低(P<0.01)。 7．腦組織病理變化：HE染色光鏡下見腦出血組大鼠血腫周圍組織炎性細(xì)胞浸潤及水腫情況比對照組均嚴(yán)重；與腦出血組相比，治療組大鼠上述情況明顯緩解。 結(jié)論 1．腦出血后自由基的大量產(chǎn)生、TNF-α的過量釋放與血腫周圍組織水腫、神經(jīng)元損傷病生機(jī)制密切相關(guān)。 2．腦出血后自由基大量產(chǎn)生，可進(jìn)一步導(dǎo)致NF-кB活化，其下游的TNF-α過量釋放。證實(shí)腦出血大鼠炎性機(jī)制與自