免疫細(xì)胞功能檢測法用于中國腎移植受者免疫狀態(tài)的監(jiān)測.pdf

1、目的：采用免疫細(xì)胞功能檢測法，評估中國成人腎移植受者的免疫狀態(tài)，并建立符合評價(jià)中國腎移植受者免疫狀態(tài)的參考值標(biāo)準(zhǔn)。
　　 方法：將106例門診隨訪及住院治療的腎移植受者分成三組，其中感染者（感染組）34 例；急、慢性排斥反應(yīng)者（排斥組）9 例；臨床狀態(tài)穩(wěn)定者（對照組）63 例。三組受者中，91 例采用以鈣調(diào)蛋白磷酸酶抑制劑(calcineurininhibitor, CNI)為基礎(chǔ)的三聯(lián)免疫抑制方案， 6 例采用西羅莫司(sir

2、olimus)為基礎(chǔ)的三聯(lián)免疫抑制方案，9 例因嚴(yán)重感染在采集血液樣本時(shí)已經(jīng)停止服用CNI。用肝素鈉抗凝管采集腎移植受者外周靜脈血樣本，用植物血凝素(phytohemagglutinin, PHA)刺激后置于5％CO2/37℃孵育箱中孵育16 h。孵育后加入單克隆抗體免疫磁珠分離其中的CD4+ T 細(xì)胞，將分離出來的CD4+ T 細(xì)胞裂解使其釋放胞內(nèi)三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate, ATP)，最后加入免疫熒光試劑

3、并用照度計(jì)測定ATP 的含量。根據(jù)檢測結(jié)果，分析ATP 水平的分布及不同組別之間的差異，并采用接受者工作特征曲線(receiver operating characteristic, ROC)，劃定中國腎移植受者感染發(fā)生的診斷界值。在行免疫細(xì)胞功能檢測的同時(shí)，行T 細(xì)胞亞群（測定CD3+ T、CD4+ T、CD8+ T 細(xì)胞在PBMC 中所占的比例及CD4+ T/CD8+ T 細(xì)胞比值）及CNI 治療藥物濃度檢測，分析腎移植受者ATP

4、值與T 細(xì)胞各亞群比例及CNI 血藥濃度之間的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：感染組腎移植受者的ATP 平均值為（163.5±127.8）ng/mL；排斥組為（414.7±137.1）ng/mL；對照組為（280.1±124.9）ng/mL。任意兩組相比，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。中國腎移植受者感染發(fā)生的ATP臨界診斷值為135ng/mL。和對照組相比，感染組CD3+ T 細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞的比例顯著上升，而CD4+

5、T/CD8+ T 細(xì)胞比值則下降，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；而排斥組與對照組相比，差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組CNI 治療藥物濃度相比，差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：感染狀態(tài)下的腎移植受者CD4+ T 細(xì)胞內(nèi)ATP 含量明顯減低，提示其免疫力低下；發(fā)生排斥反應(yīng)的受者，ATP 含量明顯上升，提示其免疫力增強(qiáng)。通過建立符合中國腎移植受者的ATP 臨界值范圍，可以更為準(zhǔn)確地評估中國腎移植受者的免疫狀態(tài)