鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶信號(hào)通路及負(fù)調(diào)控信號(hào)糖原合成酶激酶-3_對(duì)大鼠經(jīng)皮血管成形術(shù)后再狹窄作用及干擾研究.pdf

1、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈血管成形術(shù)(PCTA)術(shù)是目前治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化所致缺血性心臟病的有效方法之一,但是單純PTCA術(shù)后仍有很多患者出現(xiàn)手術(shù)局部的再狹窄。隨著支架的出現(xiàn),雖然顯著降低了術(shù)后再狹窄,但再狹窄仍然存在,所以介入治療后再狹窄病變?nèi)允切g(shù)后亟待解決的難題。大量文獻(xiàn)表明,Ca2+/CaM-CaN-NFAT信號(hào)通路在再狹窄形成中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)—炎癥、血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cells,VSMC)遷移及增殖中

2、起重要作用,許多與再狹窄相關(guān)的炎癥因子都是通過(guò)該信號(hào)通路介導(dǎo)起作用的。Ca2+/CaM-CaN-NFAT信號(hào)通路介導(dǎo)炎癥過(guò)程,促發(fā)血小板黏附、血栓形成,還可釋放多種生物活性物質(zhì)刺激內(nèi)皮、VSMC增殖及膠原增生。糖原合成酶激酶-3(Glycogen synthase 3,GSK-3)是典型的CaN-NFAT信號(hào)負(fù)調(diào)節(jié)途徑,可使核內(nèi)NFAT磷酸化,而再度回到胞漿并失去作用。他汀類藥物(statins),即3-羥基3-甲基戊二酰輔酶A(HMG

3、2CoA)還原酶抑制劑,廣泛用于冠心病的一級(jí)和二級(jí)預(yù)防。除降脂作用外,他汀類藥物還具有抑制平滑肌細(xì)胞的遷移、增殖,改善血管內(nèi)皮功能,抑制炎癥反應(yīng),抑制血小板功能,抑制血栓形成,抑制新生血管形成,抑制氧化應(yīng)激等功能,這些效應(yīng)可作用于再狹窄許多病理環(huán)節(jié)。
　　研究目的:
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)球囊損傷大鼠腹主動(dòng)脈后致再狹窄模型中,研究Can-NFAT通路及GSK-3β信號(hào)分子的活化在術(shù)后再狹窄的作用及以及CaN特異性抑制劑環(huán)孢素A(Cy

4、closporin-A,CSA)和辛伐他汀(Simvastatin)對(duì)大鼠PTA術(shù)后術(shù)后再狹窄的影響的影響,為防治血管再狹窄提供新的理論依據(jù)。
　　方法:
　　雄性SD大鼠48只,隨機(jī)分為假手術(shù)組(O組)(n=12)、球囊組(P組)(n=12)、球囊損傷+環(huán)孢素組(C組)(n=12)、球囊損傷+辛伐他汀組(S組)(n=12)。環(huán)孢素組、辛伐他汀組大鼠行PTA術(shù)前3天開(kāi)始分別每天灌喂CSA(12.5mg/kg.day)、辛伐他

5、汀(20mg/kg.d),假手術(shù)組、球囊組大鼠灌喂等容積0.5％羧甲基纖維素鈉。PTA術(shù)后28天取材,常規(guī)組織切片觀察血管病理學(xué)改變,Realtime PCR(RT-PCR)法檢測(cè)血管組織中GSK-3β、IL-2和活化T細(xì)胞核因子-1(NFATC1)的mRNA表達(dá)變化,western blot法檢測(cè)鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin,CaN)、活化T細(xì)胞核因子-1(NFATC1),GSK-3β,P-GSK-3β在血管壁中的蛋白表達(dá)水

6、平。
　　結(jié)果:
　　PTA術(shù)后形成的新生內(nèi)膜,內(nèi)膜厚度不均。P組、C組、S組較O組內(nèi)膜/中膜厚度明顯增加(P<0.01),C組、S組較P組增生減低。球囊損傷組大鼠,損傷血管組織CaNmRNA、NFATc1mRNA、IL-2mRNA表達(dá)與對(duì)照組比較明顯升高(P<0.05),藥物組表達(dá)則較球囊組明顯降低(P<0.05)。O組、P組、C組、S組GSK-3β表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。Western blot法檢測(cè)血管組織C

7、an和NFATC1,GSK-3β,P-GSK-3β蛋白表達(dá)量:P組、C組、S組Can和NFATC1較O組表達(dá)上升,C組,S組較P組下降,GSK-3β表達(dá)各組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P組、C組、S組的P-GSK-3β蛋白表達(dá)量較O組升高,C組、S組的P-GSK-3β較P組減少。
　　結(jié)論:
　　1、CaN-NFATc信號(hào)通路在球囊損傷術(shù)后再狹窄形成的炎癥過(guò)程中起作用。伴隨Can-NFAT信號(hào)通路及其負(fù)調(diào)控信號(hào)GSK-3β途徑的活化。