Exendin-4對(duì)游離脂肪酸介導(dǎo)的βTc6細(xì)胞GK和GLUT2表達(dá)改變的干預(yù)作用.pdf

1、目的：1.探討游離脂肪酸(FFA)對(duì)小鼠胰島素瘤細(xì)胞系β Tc6細(xì)胞葡萄糖激酶(GK)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)表達(dá)改變的影響。
　　 2.應(yīng)用Exendin-4干預(yù)FFA介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞損害，觀察Exendin-4干預(yù)后上述研究指標(biāo)的變化，探討Exendin-4對(duì)脂毒性狀態(tài)下的胰島β細(xì)胞是否具有保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.體外培養(yǎng)β Tc6細(xì)胞，不同濃度FFA(0.25mmol/L、

2、0.5mmol/L、1.0mmol/L)作用24小時(shí)，應(yīng)用RT-PCR和Westem Blot檢測GK和GLUT2表達(dá)情況，并觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
　　 2.應(yīng)用不同濃度Exendin-4(5nmol/L、10nmol/L、50nmol/L)孵育β Tc6細(xì)胞不同時(shí)限(6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí))，再予1.0mmol/L FFA作用24小時(shí)，應(yīng)用RT-PCR和Western Blot檢測GK和GLUT2表達(dá)情況，并觀察細(xì)胞形態(tài)變化

3、。
　　 結(jié)果：
　　 1.經(jīng)過0.25mmol/L FFA24h作用后，可見細(xì)胞團(tuán)問凋亡小體逐步增多，但未見細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的明顯變化。0.50mmol/L～1.00mmol/L FFA24h作用之后，β Tc6細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡趨勢，細(xì)胞內(nèi)可見脂滴積聚，細(xì)胞間連接融合明顯減少，細(xì)胞團(tuán)有崩解的趨勢，隨著濃度的增大，上述現(xiàn)象愈加明顯。
　　 2.經(jīng)0.25mmol/L FFA作用24小時(shí)，β Tc6細(xì)胞GK和GLUT2 m

4、RNA及其蛋白表達(dá)水平并未發(fā)生明顯改變，但在0.50～1.00mmol/L FFA作用組β Tc6細(xì)胞GK和GLUT2 mRNA和蛋白表達(dá)水平逐步減低。
　　 3.Exendin-4干預(yù)對(duì)脂毒性狀態(tài)下β Tc6細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的影響：
　　 (1)Exendin-4干預(yù)時(shí)間為6小時(shí)時(shí)，各濃度組未見脂毒性狀態(tài)下β Te6細(xì)胞形態(tài)上的改善。
　　 (2)Exendin-4干預(yù)時(shí)間延長至12小時(shí)，5nmol/L Exend

5、in-4干預(yù)組未見細(xì)胞形態(tài)上的改善，在10nmol/LExendin-4干預(yù)組雖然細(xì)胞仍呈現(xiàn)出皺縮、變圓、核濃縮的形態(tài)，但胞內(nèi)脂滴積聚減輕，細(xì)胞團(tuán)崩解減少，細(xì)胞貼壁的活性部分恢復(fù)。將Exendin-4濃度進(jìn)一步提高至50mol/L時(shí)，β Tc6細(xì)胞的形態(tài)未見進(jìn)一步改善。
　　 (3)Exendin-4干預(yù)時(shí)間進(jìn)一步延長至24小時(shí)，5nmol/L Exendin-4干預(yù)組細(xì)胞形態(tài)未見明顯改善，但細(xì)胞內(nèi)脂滴積聚減輕。將Exendin

6、-4干預(yù)濃度提高到10nmol/L時(shí)，細(xì)胞出現(xiàn)抱成團(tuán)的特性以及連接融合的趨勢，脂滴進(jìn)一步減少，部分細(xì)胞胞漿內(nèi)可見顆粒狀分泌小泡。我們進(jìn)一步將Exendin-4預(yù)干預(yù)濃度提高到50nmol/L，在顯微鏡下尚未見β Tc6細(xì)胞形態(tài)的進(jìn)一步改善。
　　 4.Exendin-4干預(yù)對(duì)脂毒性狀態(tài)下βTc6細(xì)胞GK、GLUT2mRNA和蛋白表達(dá)的影響：
　　 (1)Exendin-4干預(yù)6小時(shí)，各濃度組未見脂毒性狀態(tài)下βTc6細(xì)胞G

7、K、GLUT2mRNA和蛋白表達(dá)的明顯改善。
　　 (2)Exendin-4干預(yù)時(shí)間延長至12小時(shí)，在5nmol/L、10mol/L和50nmol/LExendin-4作用下，在脂毒性狀態(tài)下的β Tc6細(xì)胞GK、GLUT2mRNA和蛋白表達(dá)逐步升高。
　　 (3)Exendin-4干預(yù)時(shí)間延長至24小時(shí)，在5nmol/L和10nmol/L Exendin-4干預(yù)組，隨著濃度的增加，β Tc6細(xì)胞GK、GLUT2mRNA和

8、蛋白的表達(dá)進(jìn)一步逐漸升高；但是在50nmol/L Exendin-4干預(yù)組，β Tc6細(xì)胞GK、GLUT2mRNA和蛋白表達(dá)水平并沒有比10nmol/LExendin-4干預(yù)組有進(jìn)一步升高。
　　 結(jié)論：
　　 1.短期低濃度FFA作用時(shí)，胰島β細(xì)胞的GK和GLUT2表達(dá)未受到影響，但隨著FFA作用濃度的增加，β細(xì)胞的GK和GLUT2表達(dá)水平逐漸下調(diào)。
　　 2.短期低濃度FFA作用對(duì)胰島β細(xì)胞生長沒有產(chǎn)生明顯的