山楂葉總黃酮對(duì)游離脂肪酸損傷胰島細(xì)胞保護(hù)作用的初步研究.pdf

1、山楂葉總黃酮（HLF）是從山楂葉片中提取出來的主要活性物質(zhì)。近年來大量的研究顯示HLF在調(diào)節(jié)血脂代謝方面有良好的作用；研究結(jié)果也同樣顯示出HLF可以改善高脂大鼠的高胰島素血癥。然而HLF在具有多種對(duì)糖脂代謝有益作用的同時(shí)，其對(duì)脂毒性損傷的胰島細(xì)胞是否有保護(hù)作用尚不明確。因此，本研究以胰島β細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察和分析HLF對(duì)游離脂肪酸損傷后胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　目的：
　　觀察HLF對(duì)脂毒性損傷的胰島βTC3細(xì)胞抗凋亡作

2、用的有效濃度及作用時(shí)間，以及對(duì)不同濃度的葡萄糖聯(lián)合棕櫚酸刺激胰島βTC3細(xì)胞后胰島素分泌能力的影響。
　　方法：
　　通過MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力觀察棕櫚酸（PA）對(duì)胰島βTC3細(xì)胞造成的脂毒性損害，并進(jìn)一步觀察HLF的保護(hù)干涉作用。胰島βTC3細(xì)胞分為正常細(xì)胞組、BSA組、PA組和HLF+PA組。分別使用10、30、50、100μg/ml的HLF與0.4mmol/L的PA共同作用24小時(shí)，篩選出HLF有效濃度。以及50μg/m

3、l的HLF與0.4mmol/L的PA共同作用24、48、72小時(shí)，觀察HLF的最佳作用時(shí)間。使用TUNEL法在熒光顯微鏡下觀察0.4mmol/L PA作用后，以及和50μg/ml HLF共同作用后細(xì)胞的凋亡，并計(jì)算凋亡指數(shù)；放免法分析各組在5mmol/L和22.4mmol/L濃度的葡萄糖刺激后胰島細(xì)胞分泌胰島素能力；Western Blot法觀察PA和HLF對(duì)Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1．MTT結(jié)果

4、顯示：10-100μg/ml的HLF對(duì)0.4mmol/L PA誘導(dǎo)的胰島βTC3細(xì)胞損傷均有保護(hù)作用，各濃度的HLF和PA作用后細(xì)胞的活力均高于單獨(dú)PA組（P＜0.05），并且50μg/ml的HLF與0.4mmol/L PA共同處理胰島βTC3細(xì)胞24小時(shí)保護(hù)作用最好。
　　2．TUNEL結(jié)果顯示：50μg/ml HLF和0.4mmol/LPA共同處理后的胰島細(xì)胞凋亡指數(shù)比PA處理后的凋亡指數(shù)低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。<

5、br>　　3．50μg/ml的HLF和0.4mmol/L PA共同處理后的胰島βTC3細(xì)胞在5mmol/l和22.4mmol/l濃度葡萄糖的刺激下，胰島素分泌值均高于PA作用后（P＜0.05）；并且在5mmol/l濃度的葡萄糖刺激下，各組細(xì)胞的胰島素分泌值都高于22.4mmol/l濃度組。
　　4．Western Blot方法觀察到PA組中抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)較弱，促凋亡蛋白Bax的表達(dá)較明顯，用HLF保護(hù)干預(yù)后，抑凋亡蛋白