Exendin-4對(duì)游離脂肪酸介導(dǎo)的βTc6細(xì)胞PDX-1表達(dá)和胰島素分泌損害的干預(yù)作用.pdf

1、目的： 1、研究FFA干預(yù)前后，胰島β細(xì)胞PDX-1 mRNA表達(dá)以及相應(yīng)的胰島素分泌功能、細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞增殖能力的變化。 2、應(yīng)用Exendin-4干預(yù)FFA介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞損害，觀察Exendin-4干預(yù)后上述研究指標(biāo)的變化，探討Exendin-4對(duì)脂毒性狀態(tài)下胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用，分析可能的分子生物學(xué)機(jī)制。 方法： 1、體外培養(yǎng)BTc6細(xì)胞，不同濃度FFA(0.25mmol/L、0.5mmol/L、

2、1.0mmol/L)分別干預(yù)24、48小時(shí)，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，RT-PCR檢測(cè)PDX-1 mRNA表達(dá)的變化，放射免疫法檢測(cè)葡萄糖刺激的胰島素分泌，MTT法檢測(cè)βTc6細(xì)胞的增殖能力。 2、應(yīng)用不同濃度Exendin-4(5nmol/L、10nmol/L、50nmol/L)預(yù)孵育βTc6細(xì)胞不同時(shí)限(6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí))，再予1.0mmol/L FFA干預(yù)48小時(shí)，觀察細(xì)胞形態(tài)，RT-PCR檢測(cè)PDX-1 mRNA表達(dá)的

3、變化，放射免疫法檢測(cè)胰島素濃度，MTT法檢測(cè)βTc6細(xì)胞的增殖能力。 結(jié)果： 1、經(jīng)0.25～1.00 mmol/L FFA干預(yù)24小時(shí)，βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄逐步增加，但隨著干預(yù)時(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)至48小時(shí)，PDX-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄逐漸回落，特別是1.00 mmol/L FFA干預(yù)48小時(shí)βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA的表達(dá)低于空白對(duì)照組。 2、經(jīng)過(guò)0.50～1.00 mmol/L FFA24～

4、48小時(shí)的干預(yù)之后，βTc6細(xì)胞形態(tài)學(xué)上呈現(xiàn)凋亡趨勢(shì)，細(xì)胞增殖活力以及葡萄糖刺激的胰島素分泌功能降低，而0.25mmol/L FFA24小時(shí)的干預(yù)未見(jiàn)此類(lèi)現(xiàn)象。 3、Exendin-4預(yù)干預(yù)對(duì)脂毒性狀態(tài)下βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA表達(dá)的影響 (1)5nmol/L～50nmol/L Exendin-4預(yù)干預(yù)6小時(shí)尚未見(jiàn)脂毒性狀態(tài)下βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA表達(dá)的上調(diào)。 (2)將Exendin-4預(yù)干預(yù)時(shí)

5、間延長(zhǎng)至12小時(shí)，在5nmol/L和10nmol/LExendin-4作用下，βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA的表達(dá)逐漸升高，將Exendin-4濃度進(jìn)一步升高至50nmol/L則未見(jiàn)PDX-1 mRNA表達(dá)的進(jìn)一步上調(diào)。 (3)將Exendin-4預(yù)干預(yù)時(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)至24小時(shí)，在5nmol/L～50nmol/LExendin-4作用下，處于脂毒性狀態(tài)的βTc6細(xì)胞PDX-1 mRNA的表達(dá)明顯升高，并且各濃度Exendin-

6、4組間無(wú)顯著差異。 4、Exendin-4預(yù)干預(yù)對(duì)脂毒性狀態(tài)下βTc6細(xì)胞胰島素分泌能力和增殖能力的影響。 (1)5nmol/LExendin-46～12小時(shí)的孵育之后尚未見(jiàn)處于脂毒性狀態(tài)下的βTc6細(xì)胞的胰島素分泌能力和增殖能力的改善。 (2)當(dāng)Exendin-4的孵育濃度一定時(shí)(5～50nmol/L)，隨著孵育時(shí)間延長(zhǎng)至24小時(shí)，Exendin-4明顯改善βTc6細(xì)胞的胰島素分泌能力和增殖能力。 (3

7、)Exendin-4孵育濃度從10nmol/L進(jìn)一步提高至50nmol/L，尚未檢測(cè)到βTc6細(xì)胞的胰島素分泌能力和增殖能力的進(jìn)一步改善。 結(jié)論： 1、短時(shí)間低濃度的游離脂肪酸干預(yù)可介導(dǎo)β細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子PDX-1表達(dá)的上調(diào)，尚未對(duì)β細(xì)胞的增殖活性和胰島素分泌能力產(chǎn)生顯著影響。 2、長(zhǎng)時(shí)間高濃度的游離脂肪酸干預(yù)將導(dǎo)致PDX-1 mRNA的表達(dá)下調(diào)，并使β細(xì)胞的增殖活性和胰島素分泌能力受損。 3、適宜濃度的Ex