多西他賽聯(lián)合曲古抑菌霉素A治療前列腺癌的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過檢測(cè)臨床前列腺癌患者組織中HDAC6的表達(dá)情況以及與臨床指標(biāo)的關(guān)系,為前列腺癌診斷及治療提供依據(jù)。我們采用多西他賽與曲古抑菌霉素A聯(lián)合給藥的方式,并對(duì)前列腺癌腫瘤DU145產(chǎn)生協(xié)同促進(jìn)凋亡效果的進(jìn)行評(píng)價(jià),探討聯(lián)合應(yīng)用產(chǎn)生協(xié)同效果的可能機(jī)制,為后期兩種藥物聯(lián)合進(jìn)入臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　從病理組織庫中隨機(jī)選取臨床資料齊全的前列腺癌組織標(biāo)本并選取前列腺增生的組織為對(duì)照,對(duì)HDAC6進(jìn)行免疫組化染

2、色,觀察其在前列腺癌組織、癌旁組織及前列腺增生組織中的的表達(dá)差別;評(píng)價(jià)HDAC6在前列腺癌與前列腺增生中的表達(dá)區(qū)別,分析HDAC6表達(dá)與前列腺癌患者年齡、血清PSA水平、Gleason評(píng)分、TNM分期的關(guān)系。
　　通過多西他賽與曲古抑菌霉素A聯(lián)合應(yīng)用作用于體外培養(yǎng)的前列腺癌DU145細(xì)胞,CCK-8法測(cè)定各組藥物對(duì)DU145腫瘤細(xì)胞的抑制率,流式細(xì)胞儀檢測(cè)聯(lián)合用藥的對(duì)細(xì)胞凋亡指數(shù)、細(xì)胞周期的影響;進(jìn)一步用免疫熒光染色confoca

3、l觀察聯(lián)合用藥對(duì)DU145細(xì)胞中微管蛋白表達(dá)水平影響;并提取細(xì)胞總蛋白,western bloting方法檢測(cè)細(xì)胞中微管蛋白、HDAC6蛋白及細(xì)胞凋亡過程中重要的蛋白變化,探討兩藥聯(lián)合用藥產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用的可能機(jī)制。并在體外建立的前列腺癌DU145裸鼠種植模型中進(jìn)一步證實(shí)這種協(xié)同作用。
　　結(jié)果：
　　免疫組化染色前列腺癌組織與癌旁組織中HDAC6表達(dá)差異用IPP軟件側(cè)得的累計(jì)吸光度值(IOD)來反映,兩組比較HDAC6表

4、達(dá)水平統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異(P＞0.05);HDAC6表達(dá)水平在不同患者患者年齡、血清PSA、Gleason評(píng)分、TNM分期上統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無明顯差異(P＞0.05)。
　　CCK8測(cè)定多西他賽與曲古抑菌霉素A抑制DU145腫瘤細(xì)胞呈濃度、時(shí)間依賴性,曲古抑菌霉素A可降低多西他賽半數(shù)抑制率(IC50)值(P＜0.05);流式細(xì)胞儀測(cè)定兩藥合用組的DU145細(xì)胞凋亡指數(shù)及G2/M期細(xì)胞比例較單用組升高(P＜0.05)。
　　激光共聚焦及

5、免疫印跡結(jié)果均顯示聯(lián)合用藥可以增加乙?；⒐艿鞍妆磉_(dá)水平,與單用藥物組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。Westem檢測(cè)到體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞Bcl-2表達(dá)降低,Bax表達(dá)升高,caspase表達(dá)升高。
　　DU145裸鼠腫瘤生長(zhǎng)受到多西他賽與曲古抑菌霉素A抑制,導(dǎo)致腫瘤內(nèi)部細(xì)胞凋亡,兩藥合用抑制腫瘤明顯生長(zhǎng)(P＜0.05),聯(lián)合應(yīng)用組較單用藥物組細(xì)胞凋亡水平差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提取裸鼠腫瘤蛋白檢測(cè)乙?；⒐艿鞍椎母淖?/p>

6、,以兩藥合用組最明顯,與單用藥物組及空白對(duì)照組比較,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.HDAC6在前列腺增生組織陰性表達(dá),前列腺癌及癌旁組織中HDAC6表達(dá)陽性,且染色強(qiáng)度無明顯差別。HDAC6蛋白在前列腺癌中的表達(dá)患者年齡、血清PSA水平、Gleason評(píng)分、TNM分期無相關(guān)性。
　　2.多西他賽、曲古抑菌霉素A抑制DU145腫瘤細(xì)胞增殖呈濃度、時(shí)間依賴性。聯(lián)合應(yīng)用對(duì)體外培養(yǎng)的DU145腫瘤細(xì)