規(guī)?；N雞場(chǎng)胚胎疾病病原學(xué)研究及禽波氏桿菌16SrRNA基因序列分析.pdf

1、禽類胚胎性疾病是一類由多病原引起的綜合性疾病，可造成禽胚發(fā)育受阻，胚胎死亡，孵化率降低等現(xiàn)象，導(dǎo)致養(yǎng)禽業(yè)的重大經(jīng)濟(jì)損失。2004年6月份以來，山東某一大型AA父母代肉種雞場(chǎng)(飼養(yǎng)120萬套肉種雞，共分12個(gè)分場(chǎng))第2、3、5分場(chǎng)的種雞群所產(chǎn)種蛋明顯的出現(xiàn)胚胎死亡、孵化率降低、弱雛增多，雛雞出現(xiàn)呼吸道癥狀，飼養(yǎng)到30d左右時(shí)，大腸桿菌及新城疫病毒等的感染率明顯升高，雞只生長(zhǎng)發(fā)育遲緩等現(xiàn)象，其他分場(chǎng)未出現(xiàn)類似情況，由此推測(cè)該病與種雞群有關(guān)。

2、為了進(jìn)一步探討引起該規(guī)?；N雞場(chǎng)胚胎性疾病的原因，本研究通過流行病學(xué)調(diào)查及病原學(xué)檢查，并對(duì)其主要病原進(jìn)行PCR檢測(cè)，為規(guī)模化種雞場(chǎng)胚胎性疾病的防治提供理論依據(jù)。 本研究共分3部分： 一、規(guī)?；N雞場(chǎng)胚胎性疾病病原學(xué)研究 2004年6月份以來，山東某一大型AA父母代肉種雞場(chǎng)孵化場(chǎng)出現(xiàn)胚胎死亡、弱雛增多，孵出的雛雞30d左右出現(xiàn)免疫應(yīng)答不良、生長(zhǎng)緩慢等癥狀。通過對(duì)該大型AA父母代肉種雞場(chǎng)第2、3、5分場(chǎng)產(chǎn)蛋雞及其所產(chǎn)

3、種蛋孵出的1d商品雛雞、30～40d商品雞的血清抗體檢測(cè)，雞傳染性貧血病病毒(CIAV)、病毒性關(guān)節(jié)炎病毒(VAV)平均陽性率分別為4.67％、3.00％，雞白痢、雞敗血支原體、滑液囊支原體、雞大腸桿菌和禽波氏桿菌平均陽性率分別為13.59％、12.69％、8.10％、19.62％、37.14％；從死亡雞胚、肉仔雞弱雛和死雛、商品育成雞等內(nèi)臟器官進(jìn)行病原學(xué)檢查，結(jié)果主要分離到禽波氏桿菌(62.60％)、大腸桿菌(51.50％)、沙門氏菌

4、(26.30％)和支原體(26.67％)四種病原菌及CIAV、VAV兩種病毒。結(jié)果表明造成該病的主要原因是由禽波氏桿菌、沙門氏菌、大腸桿菌、支原體及CIAV、VAV共感染種雞后，由種蛋垂直傳播到雞胚、雛雞造成的。 二、主要免疫抑制病病原的分子生物學(xué)調(diào)查 當(dāng)雞群中存在免疫抑制性病毒的感染時(shí)，雞群將對(duì)其它病毒或細(xì)菌變得易感，且感染的癥狀、病變不典型，并造成免疫失敗。本研究通過流行病學(xué)調(diào)查與病原學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)該場(chǎng)存在蛋傳遞性免疫

5、抑制性病毒(雞傳染性貧血病病毒、病毒性關(guān)節(jié)炎病毒)的感染。為了解該場(chǎng)是否存在蛋傳遞性病毒與其他免疫抑制性傳染因子的多重感染，本研究將采取的肉仔雞弱雛和死雛、商品育成雞等的臟器(胸腺、脾、法氏囊、關(guān)節(jié)液及骨髓等)，分別按常規(guī)方法提取組織DNA與RNA，通過四重PCR方法檢測(cè)CIAV、MDV、REV、ALV，通過RT-PCR方法檢測(cè)IBDV和VAV，結(jié)果僅檢測(cè)到CIAV和VAV的存在，陽性率分別為7.34％和5.02％，這一結(jié)果顯示,CIA

6、V和VAV感染是導(dǎo)致該雞場(chǎng)發(fā)生免疫抑制的主要病因之一。 三、禽波氏桿菌16SrRNA基因序列分析 病原學(xué)研究結(jié)果表明禽波氏桿菌是影響該大型AA父母代肉種雞雞胚胎性疾病的主要病因之一(分離率為62.60％)，為進(jìn)一步研究其分子生物學(xué)特性，本實(shí)驗(yàn)建立了禽波氏桿菌的16SrRNA序列分析鑒定方法。通過PCR反應(yīng)對(duì)本實(shí)驗(yàn)分離到的禽波氏桿菌以及本實(shí)驗(yàn)室分離保存的9株禽波氏桿菌、3株兔支氣管敗血波氏桿菌及1株豬支氣管敗血波氏桿菌菌株

7、，擴(kuò)增其16SrRNA基因的5’端片段(783bp)，并測(cè)定所得片段的DNA序列。用DNAStar分析軟件將所獲得的序列與GenBank中的禽波氏桿菌序列進(jìn)行比較，由此構(gòu)建禽波氏桿菌菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)分離到的禽波氏桿菌與9株已分離保存的禽波氏桿菌核苷酸序列同源性為99.5％～99.9％，該10株禽波氏桿菌核苷酸序列與GenBank中收錄的AF177666株禽波氏桿菌核苷酸序列同源性為82.0％～82.5％，與兔支氣管敗血波氏