hMSCs成骨分化相關(guān)IncRNAs的篩選和鑒定.pdf

1、目的：篩選和鑒定人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)成骨分化相關(guān)的lncRNAs。
　　 方法：利用Refseq，UCSC knowngenes，Ensembl，H-invDB7.0，RNAdb2.0，NRED生物軟件分析成骨基因相關(guān)的lncRNAs，綜合獲得可能的成骨相關(guān)lncRNAs；密度梯度法分離hMSCs，地塞米松、維生素C、β-甘油磷酸鈉誘導(dǎo)hMSCs成骨分化，通過ALP測定及鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色進(jìn)行成骨誘導(dǎo)鑒定；qRT-PC

2、R驗(yàn)證hMSCs成骨分化前、后差異表達(dá)的lncRNAs，以及成骨分化前、后差異表達(dá)的基因BMP1、MSX1、Runx2、Smurf-1、ALP。
　　 結(jié)果：通過上述生物軟件綜合分析發(fā)現(xiàn)3個(gè)成骨基因MSX1、BMP1和Smurf1周圍存在相關(guān)lncRNAs。4個(gè)lncRNAs(AK129811、AK024937、AK096529、uc003ups)與成骨基因Smurf-1相關(guān)；2個(gè)lncRNAs(AF289591和uc003xb

3、e)與成骨基因BMP1相關(guān)；1個(gè)lncRNAs(AK056311)與成骨基因MSX1相關(guān)。ALP檢測示：與對(duì)照組細(xì)胞相比，成骨誘導(dǎo)組細(xì)胞1周ALP值最高，達(dá)到16.82±1.64nmol/min·OD450，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長，ALP值逐漸降低，3周降至8.37±1.01 nmol/min·OD450。鈣結(jié)節(jié)染色顯示hMSCs成骨誘導(dǎo)分化2周后胞外開始出現(xiàn)少量鈣結(jié)節(jié)，隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長鈣結(jié)節(jié)數(shù)量逐漸增加，成骨誘導(dǎo)至第3周鈣結(jié)節(jié)最多，定量測

4、定鈣濃度達(dá)716.10±49.46mg/ml。RT-qPCR結(jié)果顯示絕大部分lncRNAs在hMSCs成骨分化過程中表達(dá)均下調(diào)，其中2個(gè)與Smurf-1相關(guān)lncRNAs(AK096529和uc003ups)與成骨誘導(dǎo)前相比，存在顯著性下調(diào)。1個(gè)與MSX1相關(guān)的lncRNAs(AK056311)與成骨誘導(dǎo)前相比，也存在顯著性下調(diào)。同時(shí)，成骨分化基因Runx2、ALP表達(dá)顯著性上調(diào)，MSX1、Smurf-1表達(dá)顯著性下調(diào)。