淫羊藿苷調(diào)控成骨分化的機制研究.pdf

1、目的：研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷（icariin,ICA）能促進(jìn)骨折后骨愈合，維持去卵巢大鼠骨量防止骨質(zhì)疏松的發(fā)生。闡明ICA抗骨質(zhì)疏松的分子機制，是合理利用ICA對抗骨質(zhì)疏松的關(guān)鍵所在。本實驗旨在觀察ICA對前成骨細(xì)胞（MC3T3-E1細(xì)胞）增殖、分化等的影響，BMP和Wnt/β-catenin信號通路是否參與ICA促分化作用以及兩條通路是否存在交互作用，為合理開發(fā)利用ICA奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：不同濃度（10-10-10-5M）的I

2、CA干預(yù)MC3T3-E1細(xì)胞3、6、9天后采用MTT法檢測細(xì)胞增殖程度以及測定堿性磷酸酶活性，確定ICA最適促分化濃度。最適ICA濃度干預(yù)MC3T3-E1細(xì)胞7天后應(yīng)用實時定量PCR法檢測BMP和Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)分子的基因表達(dá)。最后ICA與BMP或Wnt/β-catenin信號通路抑制劑（Noggin、DKK-1）聯(lián)合使用干預(yù)MC3T3-E1細(xì)胞，茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色觀察鈣化程度以及Western Blot檢測BMP-

3、2蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：ICA促進(jìn)MC3T3-E1的增殖和分化，且10-9MICA促進(jìn)增殖和分化的能力最強。與對照組相比，ICA能明顯上調(diào)BMP和Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)分子（BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclinD1）的mRNA表達(dá)。Noggin或DKK-1能減少細(xì)胞鈣化，且兩者聯(lián)合作用時抑制更加明顯。與ICA單獨作用相比，DKK-1阻斷Wnt/β-catenin信號通路，再使用ICA干預(yù)7天