人參皂苷對(duì)小鼠骨髓MSC體外增殖及成骨分化的影響.pdf

1、研究背景：間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)的增殖和成骨分化能力減低可能是骨質(zhì)疏松癥等疾病發(fā)病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)，已有研究表明人參皂苷對(duì)這些疾病具有防治效果。最近有作者報(bào)告，人參皂苷能促進(jìn)大鼠骨髓MSC的體外增殖，對(duì)MSC成骨分化的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 目的：本工作旨在研究人參皂苷對(duì)骨髓MSC增殖和成骨分化的影響，揭示其作用機(jī)制，以深入認(rèn)識(shí)人參皂苷對(duì)MSC的藥理作用，并為人參皂苷用于骨質(zhì)疏松癥等疾病的防治提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　 方法：進(jìn)

2、行小鼠骨髓MSC集落形成實(shí)驗(yàn)、傳代培養(yǎng)和成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)，分組在培養(yǎng)體系中加入不同劑量的人參總皂苷(終濃度為25～100mg/L)。測(cè)定MSC集落形成率、計(jì)數(shù)傳代擴(kuò)增細(xì)胞和進(jìn)行MTT比色試驗(yàn)。在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后，進(jìn)行鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色和堿性磷酸酶(ALP)活性檢測(cè)；而且應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)ALP和BMP-2的mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：在人參總皂苷為100mg/L的體外培養(yǎng)體系中，MSC集落產(chǎn)率顯著增高，MSC傳代擴(kuò)增細(xì)胞數(shù)明

3、顯高于對(duì)照組，而在25～50mg/L范圍內(nèi)，MSC集落產(chǎn)率和傳代擴(kuò)增細(xì)胞數(shù)的變化無(wú)顯著性意義。MSC傳代擴(kuò)增細(xì)胞受100mg/L人參總皂苷作用24h后，MTT試驗(yàn)吸光值(A490值)顯著高于對(duì)照組；而在50mg/L和100mg/L人參皂苷作用48h后，A490值均明顯高于對(duì)照組。茜素紅染色后的鈣結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，成骨誘導(dǎo)液+100mg/L人參皂苷組與成骨誘導(dǎo)液對(duì)照組相比，鈣結(jié)節(jié)數(shù)量有明顯增多(P＜0.05)；其余實(shí)驗(yàn)組與成骨誘導(dǎo)液組相比

4、差異無(wú)顯著性意義(P＞0.05)。與成骨誘導(dǎo)液對(duì)照組相比，在MSC傳代擴(kuò)增細(xì)胞成骨誘導(dǎo)后的第14d、21d，成骨誘導(dǎo)液+100mg/L人參皂苷組的ALP活性顯著增高，而在誘導(dǎo)后第7d，ALP活性的差異沒(méi)有顯著性。25mg/L和50mg/L人參總皂苷對(duì)MSC傳代擴(kuò)增細(xì)胞的ALP活性無(wú)明顯影響。在誘導(dǎo)培養(yǎng)體系中，與0mg/LGS相比，當(dāng)GS為100mg/L時(shí)，成骨細(xì)胞的ALP mRNA表達(dá)水平明顯上升；而GS為50mg/L、100mg/L時(shí)

5、，BMP-2 mRNA呈高表達(dá)。與成骨誘導(dǎo)液對(duì)照組相比，成骨誘導(dǎo)液+100mg/L人參總皂苷組的ALP和BMP-2 mRNA表達(dá)水平均顯著增高；+50mg/L人參皂苷組的ALPmRNA表達(dá)水平也顯著增高，而B(niǎo)MP-2 mRNA的表達(dá)水平無(wú)明顯差異；+25mg/L人參總皂苷組的ALP和BMP-2 mRNA表達(dá)水平均無(wú)明顯差異。
　　 結(jié)論：人參總皂苷能促進(jìn)體外原代培養(yǎng)的小鼠骨髓MSCs及其傳代擴(kuò)增細(xì)胞的增殖。對(duì)小鼠骨髓MSCs傳代