小鼠自發(fā)性乳腺癌發(fā)生相關(guān)的血清差異蛋白初步研究.pdf

1、目的：運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)雙向電泳技術(shù)，研究自發(fā)乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清蛋白質(zhì)組表達(dá)圖譜的差異，結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)和生物信息學(xué)方法尋找和確定小鼠自發(fā)性乳腺癌發(fā)生相關(guān)的特征性血清差異蛋白，為乳腺癌發(fā)生及早期診斷的蛋白質(zhì)指紋圖譜的建立奠定基礎(chǔ)。 方法：1在自發(fā)乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠內(nèi)眥取血，5000rps/min，離心10min后收集血清，將血清標(biāo)本進(jìn)行雙向電泳，以固相pH梯度(IPG)等電聚焦(IEF

2、)為第一向和垂直十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)為第二向，雙向電泳結(jié)果經(jīng)銀染和ImageMaster2D5.0軟件分析進(jìn)行數(shù)字化匹配與對(duì)比，并通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法評(píng)價(jià)雙向凝膠電泳結(jié)果，確認(rèn)差異蛋白點(diǎn)。 2經(jīng)雙向電泳確認(rèn)為有差異的蛋白點(diǎn)，重新進(jìn)行雙向電泳后進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色，通過(guò)電噴霧-離子肼串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-TOF)進(jìn)行鑒定，獲得的肽圖和氨基酸序列經(jīng)過(guò)SEQUEST數(shù)據(jù)庫(kù)檢索分析后，識(shí)別鑒定各個(gè)蛋白質(zhì)。通過(guò)搜

3、索IPImouse蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)鑒定出的各個(gè)蛋白質(zhì)進(jìn)行功能分析，闡述其在乳腺癌發(fā)生過(guò)程中作用的相關(guān)機(jī)制。 結(jié)果：1雙向電泳預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，自發(fā)乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清的雙向電泳圖譜清晰、重復(fù)性較好，銀染后經(jīng)ImageMaster2D5.0軟件分析，不同膠匹配點(diǎn)相對(duì)含量的比值大于10者認(rèn)為存在差異，共找到15個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)。其中6個(gè)點(diǎn)在自發(fā)乳腺癌小鼠和正常TA2小鼠表達(dá)缺失，在正常TA1小鼠表達(dá)；4個(gè)點(diǎn)在自發(fā)乳

4、腺癌小鼠表達(dá)下調(diào)，在正常TA1小鼠表達(dá)上調(diào)，在正常TA2小鼠表達(dá)缺失；1個(gè)點(diǎn)在自發(fā)乳腺癌小鼠表達(dá)下調(diào)，在正常TA2表達(dá)上調(diào)，在正常TA1表達(dá)缺失；2個(gè)點(diǎn)在自發(fā)乳腺癌小鼠表達(dá)缺失，在正常TA2小鼠表達(dá)下調(diào)，在正常TA1小鼠表達(dá)上調(diào)；2個(gè)點(diǎn)在自發(fā)乳腺癌小鼠和正常TA2小鼠表達(dá)下調(diào)，在正常TA1小鼠表達(dá)上調(diào)。 2重新對(duì)樣本進(jìn)行雙向電泳后進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色，共得到11個(gè)蛋白點(diǎn)，對(duì)這11個(gè)蛋白點(diǎn)進(jìn)行電噴霧-離子肼串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，共得到9張肽

5、質(zhì)量指紋圖譜(PMF)，經(jīng)IPImouse數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索確定了四種蛋白質(zhì)，分別為免疫球蛋白重鏈、血清白蛋白前體、clusterin前體和ApolipoproteinA-I前體，這四種蛋白在自發(fā)乳腺癌小鼠和正常TA2小鼠中表達(dá)下調(diào)或缺失，而在正常TA1小鼠中表達(dá)上調(diào)或表達(dá)。 結(jié)論：1根據(jù)蛋白質(zhì)不同的分子量和等電點(diǎn)，通過(guò)固相pH梯度雙向凝膠電泳可將自發(fā)乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清中蛋白質(zhì)成份進(jìn)行分離，并利用分析軟件分

6、析表明自發(fā)乳腺癌小鼠及正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清中存在差異蛋白質(zhì)。 2電噴霧-離子肼串聯(lián)質(zhì)譜分析鑒定的差異蛋白為人類(lèi)乳腺癌血清學(xué)診斷指標(biāo)提供了參考依據(jù)。免疫球蛋白重鏈和clusterin前體與小鼠自發(fā)性乳腺癌的發(fā)生可能存在一定的關(guān)系。免疫球蛋白重鏈在自發(fā)乳腺癌小鼠中表達(dá)缺失，可能是因?yàn)樽园l(fā)瘤小鼠存在免疫缺陷而容易受細(xì)菌、病毒感染而引發(fā)的腫瘤；clusterin前體可能與小鼠免疫活性調(diào)節(jié)有關(guān)，在自發(fā)乳腺癌小鼠中表達(dá)缺失，使