術(shù)前乳腺癌肝郁證與相關(guān)lncRNA的初步研究.pdf

1、研究背景：
　　乳腺癌(BC)是全球女性最常被診斷的癌癥之一，也是女性癌癥死亡的第二大原因。長非編碼RNA(lncRNA)是長度超過200個(gè)核苷酸，不具備蛋白編碼功能的RNA，曾被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄噪音。隨著分子生物學(xué)研究的深入，已有越來越多的證據(jù)表明lncRNAs在生物過程具有重要意義，如在基因組印記，轉(zhuǎn)錄激活和抑制，組織發(fā)育過程中l(wèi)ncRNAs起了極為關(guān)鍵調(diào)解作用。相關(guān)研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)的lncRNAs在多種人類疾病中出現(xiàn)，其中包括

2、各種類型的癌癥。
　　中醫(yī)對(duì)乳腺癌的病因病機(jī)早有認(rèn)識(shí)，對(duì)乳腺癌的辨證治療也有獨(dú)到見解，而肝郁始終被認(rèn)為是乳腺癌病因病機(jī)的關(guān)鍵，也是辨證施治的要點(diǎn)。這不僅提示肝郁證是乳腺癌的重要分型，也為臨床治療提供思路。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究均證實(shí)肝郁證與乳腺癌密切相關(guān)。最近，諸多l(xiāng)ncRNAs已顯示出在乳腺癌進(jìn)程中發(fā)揮致癌或抑癌作用。但是，對(duì)于lncRNAs與肝郁證型乳腺癌關(guān)系尚缺乏報(bào)道。因此，研究lncRNAs與乳腺癌肝郁證的

3、關(guān)系不僅有助于中醫(yī)證型分析應(yīng)用，也有助于篩查乳腺癌高危人群，或能提高早期診斷率，尋找新的藥物靶標(biāo)，為臨床研究治療提供新的方案。
　　研究目的：
　　篩查lncRNAs在乳腺癌中的表達(dá)譜。篩選肝郁證乳腺癌相關(guān)lncRNAs。研究lncRNAs在乳腺癌肝郁證中可能的作用。評(píng)估乳腺癌肝郁證相關(guān)lncRNAs的臨床價(jià)值。
　　研究方法：
　　第一部分實(shí)驗(yàn)，首先通過使用基因芯片構(gòu)建的乳腺癌相關(guān)的lncRNAs庫。隨后利用2

4、2對(duì)乳腺癌肝郁證患者的癌及配對(duì)癌旁組織樣本，使用實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)測(cè)試并驗(yàn)證微陣列數(shù)據(jù)結(jié)果的可靠性，篩選出乳腺癌肝郁證相關(guān)lncRNA，最后利用生物信息學(xué)的方法-基因本體論（GO分析）和通路分析（Pathway分析）分析乳腺癌肝郁證相關(guān)lncRNA可能的靶基因和基因產(chǎn)物富集，探討其可能的與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)，通過收集68對(duì)辨證為肝郁證的乳腺癌患者與健康對(duì)照人群的血清，通過qRT-PCR驗(yàn)證第一部

5、分中已經(jīng)確認(rèn)與乳腺癌肝郁證相關(guān)的lncRNA RP11-445H22.4在乳腺癌肝郁證患者及健康人群血清中的表達(dá)水平，受試者工作特征(ROC)曲線被用于評(píng)估循環(huán)血lncRNA RP11-445H22.4在乳腺癌肝郁證患者中的診斷價(jià)值。最后我們研究了循環(huán)血lncRNA RP11-445H22.4表達(dá)水平與乳腺癌肝郁證患者的臨床病理因素之間的關(guān)系。
　　研究結(jié)果：
　　第一部分實(shí)驗(yàn)，基因芯片結(jié)果顯示在配對(duì)的組織樣本中有790條上

6、調(diào)和637條下調(diào)lncRNAs出現(xiàn)顯著差異，qRT-PCR的驗(yàn)證結(jié)果與芯片結(jié)果一致。通過GO分析，我們發(fā)現(xiàn)上調(diào)的lncRNA與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，下調(diào)的lncRNA參與腫瘤的發(fā)展進(jìn)程。通過Pathway分析，我們發(fā)現(xiàn)44條通路與上調(diào)的轉(zhuǎn)錄本相關(guān)，31條通路與下調(diào)的轉(zhuǎn)錄本相關(guān)。其中下調(diào)的lncRNA可能通過參與鈣信號(hào)通路影響乳腺癌發(fā)生，上調(diào)的仍然與機(jī)體免疫密切相關(guān)。深一步分析，我們發(fā)現(xiàn)一條上調(diào)的lncRNA RP4-583P15.10，其靶基因

7、為ZBTB46，可能通過免疫機(jī)制參與乳腺癌的發(fā)生，一條下調(diào)的lncRNA RP11-445H22.4靶基因?yàn)閃ISP2，與乳腺癌的進(jìn)展密切相關(guān)。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)，通過與健康對(duì)照組對(duì)比，我們發(fā)現(xiàn)乳腺癌肝郁證患者的外周血lncRNARP11-445H22.4表達(dá)水平出現(xiàn)了顯著升高(p＜0.001)。ROC分析外周血lncRNARP11-445H22.4水平用于乳腺癌診斷的靈敏度和特異性分別為92％和74％，均高于現(xiàn)有的蛋白標(biāo)志物。與

8、超聲診斷相比，lncRNA RP11-445H22.4診斷的特異性與超聲接近，但靈敏度更高。相關(guān)臨床特征研究發(fā)現(xiàn)，外周血lncRNA RP11-445H22.4表達(dá)水平還與乳腺癌患者免疫組化及絕經(jīng)情況相關(guān)。
　　研究結(jié)論：
　　LncRNA參與了乳腺癌肝郁證的發(fā)生發(fā)展，其可能的機(jī)制是參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)。與傳統(tǒng)乳腺癌篩查方式相比，外周循環(huán)血lncRNA RP11-445H22.4具有診斷上的優(yōu)勢(shì)。具有作為乳腺癌肝郁證患者早期診斷