蝎毒多肽提取物對實驗性肺癌VEGF、HIF-1α和PTEN表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景：
　　 肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮。其死亡率自70年代至90年代上升幅度達(dá)111.85％，是所有惡性腫瘤中之最高，其中非小細(xì)胞肺癌占肺癌總數(shù)的80％，是最為常見的肺癌病理類型[1]。目前可供選擇的治療方法有限，導(dǎo)致肺癌死亡率高，平均5年生存率不到15％[2-4]。
　　 以腫瘤血管為靶點，開發(fā)具有抗血管生成作用的中藥是一個十分活躍的研究領(lǐng)域。腫瘤血管生成過程中多種血管生成因

2、子相互影響，尋找一種對腫瘤血管生成中多種血管生成因子具有靶向調(diào)節(jié)作用的藥物是腫瘤抗血管生成治療中亟待解決的關(guān)鍵問題之一。中醫(yī)中藥在抗腫瘤血管生成中有其獨特的優(yōu)勢。蝎毒多肽提取物(polypeptideextractfromscorpionvenom，PESV)是本實驗室從東亞鉗蝎的蝎毒中提取并分離純化的有效抗腫瘤成分，具有多種生物活性。當(dāng)前實驗研究已證明它可抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可抑制雞胚尿囊膜新生血管的生成，但其抗腫瘤血管生成的

3、機(jī)制尚未完全闡明。本研究通過體內(nèi)外實驗觀察PESV對腫瘤血管生成中VEGF、HIF-1α和PTEN表達(dá)的影響，探討其抑制腫瘤血管生成的作用機(jī)制。
　　 目的：
　　 通過體外實驗觀察PESV對人肺癌A549細(xì)胞的細(xì)胞毒作用和對VEGF、HIF-1α和PTEN表達(dá)的影響，體內(nèi)實驗觀察PESV對肺癌裸鼠移植瘤生長的影響及對VEGF、HIF-1α、PTEN基因和蛋白表達(dá)的影響，以揭示PESV抗腫瘤血管生成的作用機(jī)制，尋求中藥抗

4、腫瘤血管生成治療非小細(xì)胞肺癌的新策略。
　　 方法：
　　 1.采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測PESV對人A549細(xì)胞生長與增殖的影響，并根據(jù)吸光度值計算各藥物濃度的細(xì)胞增殖抑制率。下游實驗根據(jù)IC50值將對數(shù)生長期的A549細(xì)胞分為陰性對照組、PESV小劑量組、PESV中劑量組、PESV大劑量組，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法、Westernblot法檢測PESV干預(yù)后VEGF、HIF-1α和PTEN蛋白表達(dá)的變化。
　　 2

5、.構(gòu)建裸鼠移植瘤模型，實驗用裸鼠共18只，隨機(jī)分為3組:荷瘤對照組、高劑量組和低劑量組。PESV隔日給藥(灌胃法)一次，對照組給等體積的生理鹽水。測量腫瘤體積并計算抑瘤率，繪制腫瘤體積生長曲線，觀察PESV對腫瘤生長的抑制作用，實驗共進(jìn)行21天。
　　 3.通過RT-PCR法、Westemblot法檢測各處理組裸鼠移植瘤內(nèi)血管生成調(diào)控因子VEGF、HIF-1α和PTEN的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.PES

6、V對人A549細(xì)胞生長與增殖的影響
　　 PESV濃度在25～200μg/mL時，對A549細(xì)胞增殖抑制作用明顯，與陰性對照組相比，p均＜0.01。25～200μg/mL劑量組之間兩兩比較差異顯著，p均＜0.01，總體呈劑量一效應(yīng)關(guān)系，r=0.966，p＜0.01。
　　 2.PESV對人A549細(xì)胞中VEGF、HIF-1α和PTEN表達(dá)的影響。
　　 免疫細(xì)胞化學(xué)法結(jié)果顯示，PESV干預(yù)后A549細(xì)胞VEGF、

7、HIF-1α的表達(dá)明顯下調(diào)，各濃度組間比較(p＜0.05或p＜0.01)。PTEN的表達(dá)呈上升趨勢，各組間比較(p＜0.05或p＜0.01)。Westemblot法結(jié)果與免疫細(xì)胞化學(xué)法的結(jié)果基本一致。
　　 3.PESV對肺癌裸鼠移植瘤生長的影響
　　 PESV干預(yù)21天后，與荷瘤對照組相比，PESV高劑量組裸鼠腫瘤生長明顯受到抑制，抑瘤率達(dá)40.36％(p＜0.01);PESV低劑量組抑瘤率為20.15％，差異亦有統(tǒng)計

8、學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 4.PESV對肺癌裸鼠移植瘤中VEGF、HIF-1α和PTEN表達(dá)的影響
　　 RT-PCR法檢測結(jié)果顯示，PESV干預(yù)后腫瘤組織中VEGF和HIF-1α表達(dá)水平明顯降低，各組間比較(p＜0.05或p＜0.01)，PTEN的表達(dá)明顯升高，各組間比較(p＜0.05或p＜0.01)。Westemblot法結(jié)果與RT-PCR法的結(jié)果基本一致。
　　 結(jié)論：
　　 1.PESV可抑