SAH后遲發(fā)性腦血管痙攣中ICAM-1的表達變化及ICAM-1單克隆抗體和甲基強的松龍的防治作用.pdf

1、目的：遲發(fā)性腦血管痙攣(DCVS)是引起蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后致死或致殘的主要原因。炎癥反應(yīng)是引起DCVS主要因素之一。最明顯的改變是動脈壁的以中性粒細胞為主的炎癥細胞浸潤。炎性相關(guān)基因尤其是炎性細胞因子在痙攣動脈中表達的增加表明腦血管的炎性反應(yīng)可能是引起持續(xù)性腦血管痙攣的主要原因，并貫穿了從信號轉(zhuǎn)導(dǎo)到血管持續(xù)收縮和動脈壁結(jié)構(gòu)改變這兩個過程。內(nèi)皮細胞粘附分子-1 (ICAM-1)是細胞膜表面的糖蛋白，主要位于白細胞和血管內(nèi)皮細胞，屬

2、粘附分子免疫球蛋白超家族成員。ICAM-1與其配體結(jié)合有助于炎癥和免疫反應(yīng)，并調(diào)節(jié)粒細胞在組織受損區(qū)域的粘附、穿透和遷移作用，啟動血管壁的炎癥反應(yīng)，加重血管痙攣程度。有研究證實在腦血管痙攣時動脈壁ICAM-1的表達增高。本研究中我們采用兔枕大池二次注血的腦血管痙攣模型，并應(yīng)用免疫組化和免疫蛋白印跡的方法觀察痙攣動脈中ICAM-1活性表達的變化，同時應(yīng)用ICAM-1單克隆抗體和甲基強的松龍對SAH后遲發(fā)性腦血管痙攣進行防治，為治療DCVS

3、提供新的思路。 方法：中國白兔48只，體重2～2.5kg，隨機分為四組。A組：正常對照組(n=8)，不做枕大池穿刺注血，Day0天處死；B組：SAH組(n=24)，采用枕大池二次注血制作SAH模型，即在Day0和Day2第一、二次枕大池注血，并分別在第一次注血后Day4、Day7和Day14分三批處死，每批8只；C組： SAH+ICAM-1 單克隆抗體和甲基強的松龍組組(n=8)，枕大池注射ICAM-1單克隆抗體10μg，耳緣

4、靜脈注射甲基強的松龍30mg/kg，并在Day7處死；D組：SAH+生理鹽水組(n=8)，用等量37℃生理鹽水代替ICAM-1單克隆抗和甲基強的松龍，第一次注血后Day7處死。 HE及免疫組化：麻醉后開胸主動脈灌注(沖洗液：Hanks平衡液pH7.4 37℃ 300ml，固定液：2％多聚甲醛Hanks平衡液pH 7.4 37℃ 200ml)固定后，開顱取含有基底動脈全長的腦干及腦組織，經(jīng) 4％多聚甲醛溶液固定，備組織學(xué)檢查及管徑的測量。

5、 免疫蛋白印跡(Westem Blot)：實驗動物用氯胺酮50mg/kg快速靜推，斷頭處死，剝離基底動脈迅速放入液氮中2分鐘，-70℃冰箱保存。以備Western Blot檢測采用華東理工大學(xué)自動化所細胞免疫組織化學(xué)分析系統(tǒng)Version 2.0自動分析儀記錄陽性細胞百分率。各組數(shù)據(jù)用均數(shù)加減標準差(x±s)表示。應(yīng)用AlphMmagerTM 1220Documentation & Analysis system V5.50對

6、免疫印跡結(jié)果進行定量分析，其面積灰度值以積分光密度值(IOD)表示，記錄實驗結(jié)果。 應(yīng)用SPSS11.0軟件包進行統(tǒng)計處理。兩樣本均數(shù)間的比較用 t 檢驗；多樣本均數(shù)間的比較用單因素方差分析，以P<0.05為有顯著差異。 結(jié)論：在兔SAH后遲發(fā)性腦血管痙攣中ICAM-1表達在day4開始增加，于day7達到高峰，之后逐漸下降。與DCVS炎癥反應(yīng)時相相符。應(yīng)用ICAM-1單克隆抗體和甲基強的松龍抑制炎癥反應(yīng)的啟動和進展