組蛋白去乙酰化酶SIRT1在不同類型房顫患者中的作用機(jī)制研究.pdf

1、第一部分風(fēng)濕性心臟病合并房顫患者心房組織組蛋白去乙?；窼IRT1表達(dá)與心房纖維化的相關(guān)性研究
　　 目的：通過(guò)觀察房顫患者心房肌組織SIRT1的表達(dá)情況、心房肌纖維化的程度，SIRT1與心房纖維化的相關(guān)關(guān)系，了解房顫患者心房肌組織SIRT1的表達(dá)及其與心房纖維化的相關(guān)性，并通過(guò)檢測(cè)心房肌組織p53蛋白的表達(dá)情況，了解房顫患者心房肌組織SIRT1表達(dá)參與房顫及心房纖維化的可能機(jī)制。
　　 方法：選擇38例行心臟手術(shù)的風(fēng)濕

2、性心臟病患者，按照是否合并房顫分為兩組：持續(xù)性房顫組25例(AF組)，其中女性14例，男性11例，年齡范圍31～68歲，平均年齡(47.11±8.82)。患者的房顫持續(xù)時(shí)間為6個(gè)月～11年，平均持續(xù)時(shí)間(5.26±1.54)年。竇性心律組15例(SR)組，其中女性9例，男性6例，年齡范圍33～57歲，平均年齡48.24±5.23歲。所有患者手術(shù)前均行心臟超聲評(píng)價(jià)心臟結(jié)構(gòu)情況；所有標(biāo)本均來(lái)源于行心臟手術(shù)患者的右心耳組織。按照Trizol一

3、步法的步驟提取右心耳組織的總RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)SIRT1mRNA在心房組織的表達(dá)；采用免疫組化法檢測(cè)SIRT1蛋白、p53蛋白在心房組織的表達(dá)，采用masson染色評(píng)價(jià)心房纖維化程度。
　　 結(jié)果判定：實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)SIRT1mRNA結(jié)果：用比較閾值法測(cè)定目的基因的相對(duì)表達(dá)量。SIRT1、p53免疫組化檢測(cè)結(jié)判斷：陽(yáng)性著色定義為心房肌細(xì)胞著色部位在胞核和胞漿，以心房肌細(xì)胞核為主；陰性著色定義為心房肌細(xì)

4、胞無(wú)明顯著色，部分心房肌細(xì)胞胞漿可呈現(xiàn)淺棕色；蛋白表達(dá)量=胞核陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)(％)(每個(gè)標(biāo)本均隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野進(jìn)行測(cè)量，取其均值)。Masson染色評(píng)價(jià)心房組織纖維化程度：采用膠原半定量分析計(jì)算膠原容積分?jǐn)?shù)，該值代表心房纖維化程度。心房組織切片的光鏡拍片顯示正常膠原纖維為藍(lán)色，變性膠原纖維為白色，心房肌組織為紅色。應(yīng)用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，計(jì)算膠原容積分?jǐn)?shù)=膠原纖維/視野面積(％)(每個(gè)標(biāo)本均隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野進(jìn)行測(cè)量，取

5、其均值)。
　　 比較兩組患者SIRT1mRNA及蛋白表達(dá)情況、p53蛋白表達(dá)情況、心房纖維化程度，分析SIRT1表達(dá)與心房纖維化的關(guān)系，SIRT1表達(dá)與p53蛋白表達(dá)的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.兩組患者心房纖維化程度比較可見(jiàn)AF組纖維化程度更明顯，AF組膠原容積分?jǐn)?shù)明顯高于SR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　 2.兩組患者心房組織均可見(jiàn)SIRT1mRNA表達(dá)，其中AF組患者SIRT1m

6、RNA表達(dá)高于SR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。
　　 3.兩組患者心房組織均可見(jiàn)SIRT1蛋白表達(dá)，其中AF組患者SIRT1蛋白表達(dá)高于SR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(p<0.01)。
　　 4.兩組患者心房組織均可見(jiàn)p53蛋白表達(dá)，其中AF組患者p53蛋白表達(dá)高于SR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　 5.SIRT1表達(dá)量與心房結(jié)構(gòu)的相關(guān)性分析研究：將AF組SIRT1mRNA及蛋白表達(dá)量分別與左

7、房、右房?jī)?nèi)徑行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)SIRT1表達(dá)與心房?jī)?nèi)徑無(wú)明顯相關(guān)性，其相關(guān)系數(shù)分別為：r=0.198，r=0.047(左房)，r=0.027，r=0.096，p均>0.05(右房)。
　　 6.SIRT1表達(dá)量與心房纖維化的相關(guān)分析研究：將AF組SIRT1mRNA及蛋白表達(dá)量分別與心房纖維化容積分?jǐn)?shù)行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)SIRT1mRNA及蛋白表達(dá)量與心房纖維化容積分?jǐn)?shù)均呈負(fù)相關(guān)，r=-0.643，r=-0.721，p均<0.05。

8、r>　　 7.SIRT1表達(dá)量與P53相關(guān)性分析研究：將AF組SIRT1mRNA及蛋白表達(dá)量分別與p53進(jìn)行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)SIRT1mRNA及蛋白表達(dá)量與p53無(wú)明顯相關(guān)性，r=0.163，r=0.069，p>0.05。
　　 8.SIRT1表達(dá)量與房顫持續(xù)時(shí)間相關(guān)性分析：將AF組SIRT1mRNA及蛋白表達(dá)量分別與房顫持續(xù)時(shí)間行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)SIRT1mRNA及蛋白表達(dá)量與房顫持續(xù)時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，r=-0.749，r=-0.6

9、01，p均<0.05。
　　 結(jié)論：房顫患者心房組織SIRT1表達(dá)有所增加，隨房顫持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng)，SIRT1表達(dá)呈下降趨勢(shì)，SIRT1表達(dá)與心房纖維化呈負(fù)相關(guān)，與p53表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性，提示SIRT1高表達(dá)可通過(guò)抑制心房纖維化，抑制房顫的進(jìn)展，該保護(hù)作用隨房顫持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減弱。
　　 創(chuàng)新點(diǎn)與局限性：
　　 1.本研究采用在體心房組織檢測(cè)SIRT1的mRNA及蛋白表達(dá)，試驗(yàn)對(duì)象比較新穎。
　　 2

10、.本研究針對(duì)SIRT1與風(fēng)濕性心臟病合并的房顫的相關(guān)性進(jìn)行研究，既往未有相關(guān)報(bào)道。
　　 3.本研究發(fā)現(xiàn)風(fēng)濕性心臟病合并房顫患者心房組織SIRT1表達(dá)高于竇性心律患者。
　　 4.本研究發(fā)現(xiàn)SIRT1表達(dá)與心房纖維化呈負(fù)相關(guān)，可抑制心房纖維化程度，并且該抑制作用隨房顫持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱。
　　 5.本研究發(fā)現(xiàn)SIRT1表達(dá)與p53無(wú)明顯相關(guān)性。
　　 本研究不足之處在于只對(duì)風(fēng)濕性心臟病患者的SIRT1表

11、達(dá)進(jìn)行研究，結(jié)果有局限性。本研究未闡明SIRT1抑制心房纖維化的具體機(jī)制，及SIRT1與房顫關(guān)系的具體機(jī)制，可在將來(lái)的動(dòng)物試驗(yàn)中進(jìn)一步研究。
　　 第二部分高血壓合并房顫患者外周血單個(gè)核細(xì)胞組蛋白去乙?；窼IRT1表達(dá)與氧化應(yīng)激及炎癥相關(guān)性研究
　　 目的：觀察高血壓合并房顫患者外周血單個(gè)核細(xì)胞SIRT1的表達(dá)情況，以及外周血氧化應(yīng)激指標(biāo)、hsCRP水平，了解房顫患者SIRT1表達(dá)及其與氧化應(yīng)激及炎癥因子的關(guān)系。

12、>　　 方法：選擇2011年1月至2011年12月住院的高血壓病合并房顫患者58例作為試驗(yàn)組。按照房顫的類型分為兩組：持續(xù)性房顫組33例(AF1組)，持續(xù)性房顫指房顫持續(xù)時(shí)間超6個(gè)月，年齡范圍45～83歲，平均年齡57.38±6.53歲。房顫持續(xù)時(shí)間為7個(gè)月～13年，平均時(shí)間3.58±1.07年。陣發(fā)性房顫組25例(AF2組)，陣發(fā)性房顫指房顫發(fā)作呈陣發(fā)性，每次發(fā)作時(shí)間低48小時(shí)，年齡范圍37～69歲，平均年齡56.35±5.68歲。

13、對(duì)照組：選擇2011年1月至2011年12月住院的高血壓合并竇性心律患者30例，設(shè)為竇性心律組(SR)，年齡范圍35～78歲，平均年齡52.43±9.37歲。記錄研究組所有患者的一般資料，包括年齡、性別、病史等情況。并分組整理。所有患者抽取靜脈血，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞SIRT1mRNA表達(dá)情況，用硫代巴比妥酸法測(cè)定外周血中丙二醛(MDA)含量，采用免疫比濁法測(cè)定高敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)含量。分析SIRT1在

14、房顫患者外周血的表達(dá)情況，及其與氧化應(yīng)激指標(biāo)、hsCRP的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1.三組患者單個(gè)核細(xì)胞均可見(jiàn)SIRT1表達(dá)，其中AF2組表達(dá)高于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.01，AF1組與SR組比較有增高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。p>0.05。
　　 2.各組氧化應(yīng)激指標(biāo)(MDA)結(jié)果：AF1組MDA含量高于SR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.01，AF2組MDA含量與SR組比較無(wú)明顯差異p>0.0

15、5，組間比較可見(jiàn)AF1組MDA含量高于AF2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.01。
　　 3.各組hsCRP水平比較：AF1組hsCRP含量高于SR組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.01，AF2組hsCRP含量與SR組比較有增高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p>0.05，組間比較可見(jiàn)AF1組hsCRP含量高于AF2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.01。
　　 4.各組SIRT1表達(dá)與MDA相關(guān)性分析結(jié)果顯示：AF1組SIRT1表達(dá)與MD

16、A呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為：rs=-0.416，p<0.05。AF2組SIRT1表達(dá)與MDA呈負(fù)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為rs=-0.641，p<0.01。SR組SIRT1表達(dá)與MDA無(wú)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為r=0.034，p>0.05。
　　 5.各組SIRT1表達(dá)與hsCPR相關(guān)性分析結(jié)果顯示：AF1組SIRT1表達(dá)與hsCPR無(wú)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為rs=0.027，p>0.05。AF2組SIRT1表達(dá)與hsCPR無(wú)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.00

17、4，p>0.05。SR組SIRT1表達(dá)與hsCPR無(wú)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為rs=0.007，p>0.05。
　　 6.SIRT1表達(dá)與房顫持續(xù)時(shí)間相關(guān)性分析：將AF1組SIRT1表達(dá)量與房顫持續(xù)時(shí)間行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示SIRT1表達(dá)量與房顫持續(xù)時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，rs=-0.834，p<0.01。
　　 結(jié)論：高血壓合并房顫患者外周血單個(gè)核細(xì)胞可見(jiàn)SIRT1表達(dá)增加，其中陣發(fā)性房顫患者增加明顯，持續(xù)性房顫患者有增加趨勢(shì)，而且

18、隨房顫持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸下降，SIRT1表達(dá)與外周血氧化應(yīng)激水平呈負(fù)相關(guān)，與hsCRP無(wú)明顯相關(guān)性，提示SIRT1可通過(guò)抑制氧化應(yīng)激抑制房顫的進(jìn)展，在房顫中起作用。
　　 創(chuàng)新點(diǎn)及局限性：
　　 1.本研究主要檢測(cè)高血壓患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中SIRT1的mRNA表達(dá)，研究對(duì)象有創(chuàng)新性。
　　 2.本研究針對(duì)SIRT1與高血壓合并的房顫的相關(guān)性進(jìn)行研究，既往未有相關(guān)報(bào)道。
　　 3.本研究發(fā)現(xiàn)高血壓合并房顫