MMP-9-TIMP-1在脂多糖和N-乙酰半胱氨酸干預(yù)體外孵育胎膜中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：探討人胎膜體外孵育的方法和感染引發(fā)早產(chǎn)的可能機(jī)制及N-乙酰半胱氨酸(NAC)預(yù)防感染引發(fā)早產(chǎn)的可行性，為進(jìn)一步研究胎膜的結(jié)構(gòu)和功能，以及探討預(yù)防和治療早產(chǎn)的藥物提供一定的理論依據(jù)。 方法：取20例單胎足月?lián)衿谄蕦m產(chǎn)孕婦(無(wú)妊娠合并癥、并發(fā)癥，也無(wú)臨產(chǎn)征兆，剖宮產(chǎn)指征為巨大兒臀位、頭盆不稱、疤痕子宮及社會(huì)因素)的胎膜在體外進(jìn)行孵育，共72小時(shí)，孵育48小時(shí)后，一部分胎膜給予細(xì)菌內(nèi)毒素脂多糖(LaLipopolysacchar

2、ide，LPS)和N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)干預(yù)24小時(shí)。分成五組：0小時(shí)組(取下后未經(jīng)孵育的胎膜)，24小時(shí)組，48小時(shí)組，72小時(shí)LPS組，72小時(shí)LPS+NAC組。孵育結(jié)束后，首先評(píng)價(jià)各組體外孵育胎膜的存活力，然后應(yīng)用免疫組織化學(xué)和逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)分別測(cè)定五組胎膜的基質(zhì)金屬蛋白酶-9(

3、matrix metalloproteinase-9，MMP-9)及金屬蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitot of metalloproteinase-1，TIMP-1)的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)變化，最后比較LPS組和LPS+NAC組MMP-9/TIMP-1比值的變化。 結(jié)果：1、①孵育中的胎膜肉眼及光學(xué)顯微鏡觀察：各組孵育的胎膜組織生長(zhǎng)良好，新鮮如初，換液時(shí)各培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)液均由櫻桃紅色變成淡橙色，偶見部分胎膜組織

4、邊緣有少量細(xì)胞生長(zhǎng)。②蘇木精-伊紅(HE)染色觀察：各組細(xì)胞的形態(tài)良好，胞膜完整，無(wú)皺縮，胞核無(wú)碎裂。③各組體外孵育胎膜的存活力：24小時(shí)組、48小時(shí)組、72小時(shí)LPS組、72小時(shí)LPS+NAC組分別為87﹪±1.9﹪，85﹪±1.3﹪,83﹪±1.6﹪,82﹪±1.2﹪，兩兩比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。2、MMP-9在蛋白和轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)：0小時(shí)和48小時(shí)組的表達(dá)微弱，24小時(shí)組的表達(dá)較前兩組增強(qiáng)(P<0.05)，72小時(shí)LPS