JAK2-STAT3信號通道介導粒細胞集落刺激因子影響大鼠腦出血后細胞凋亡的相關研究.pdf

1、目的:腦出血是臨床的常見病、多發(fā)病，致死率較高，發(fā)病機制不明，缺乏有效的治療方法，明確發(fā)病機制，尋找治療的分子靶點尤為重要。本實驗通過研究粒細胞集落刺激因子(G-CSF)直接作用于大鼠腦出血(ICH)后，凋亡細胞及通道蛋白P-JAK2和P-STAT3的變化，探討JAK2/STAT3信號傳導通路介導G-CSF對腦出血的抗凋亡作用。
　　方法:健康成年SD大鼠120只，雌雄不限，體重在250～300g之間，鼠齡2～3月，分為對照組、腦

2、出血組、治療組，各組按斷頭取腦的時間點不同分為6h、24h、48h、72h、168h5個亞組。腦出血組以大鼠自體尾動脈不凝血50μL，采用改良二次注入法建立大鼠腦出血模型;對照組以50μ L生理鹽水代替自體動脈血;治療組的各個時間點均在手術后1h腹腔注射G-CSF60μ g/kg，其中6h組共注射1次，24h組共注射2次，48h組共注射3次，72h組共注射4次，168h組共注射5次，注射的時間間隔為12h。造模成功后，分別取各時間點大鼠

3、行神經(jīng)功能障礙評分。評分后，用1％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，迅速斷頭取腦，將腦組織放于4％中性甲醛溶液中固定保存，以作石蠟包埋、切片，用于HE染色，P-JAK2、P-STAT3免疫組化染色及TUNEL法測定細胞凋亡。
　　結果:(1)腦出血組神經(jīng)功能障礙評分與對照組對應的各時間點比較，評分較低(P＜0.05)，神經(jīng)功能缺損較重;治療組與腦出血組對應的各時間點比較，評分增高(P＜0.05)，神經(jīng)功能受損減輕;腦出血組、治療組神經(jīng)功能障

4、礙評分均在48h最低(P＜0.05)，神經(jīng)功能受損最重;(2)HE染色可見對照組的腦組織結構完整，胞核、胞漿染色均勻;腦出血組6h、24h血腫周圍神經(jīng)細胞水腫明顯，可見大量血細胞，少量炎癥細胞，48h、72h時間點時血腫周圍神經(jīng)細胞腫脹壞死明顯，核固縮，部分核溶解，染色深，血細胞減少，炎細胞侵潤，少量膠質(zhì)細胞增生，168h可見血腫周圍神經(jīng)細胞水腫較前減輕，炎細胞減少，膠質(zhì)細胞增生明顯;治療組的腦組織結構變化在6h和24h與腦出血組相似，

5、48h、72h和168h神經(jīng)細胞腫脹壞死范圍較腦出血組小，仍可見炎癥細胞侵潤及膠質(zhì)細胞增生;(3)腦出血組、治療組凋亡細胞6h可見極少量表達，24h、48h開始明顯增多，72達高峰(P＜0.05)，168h仍有表達，分別與對照組的各亞組比較，表達增多(P＜0.05);治療組與腦出血組對應的各時間點比較，表達減少(P＜0.05);(4)腦出血組、治療組P-JAK2、P-STAT3陽性細胞6h可見少量表達，24h明顯增多，48h達高峰(P＜

6、0.05)，72h開始減少，168h仍有表達，分別與對照組比較，表達增多(P＜0.05);治療組與腦出血組比較，表達減少(P＜0.05);(5)腦出血組神經(jīng)功能障礙評分與凋亡細胞、P-JAK2、P-STAT3的表達呈負相關（r=-0.637，r=-0.848，r=-0.848; P＜0.05），凋亡細胞與P-JAK2、P-STAT3的表達呈正相關(r=0.466，r=0.760; P＜0.05)。
　　結論:粒細胞集落刺激因子能明