同種異體脂肪干細胞對SD大鼠移植脂肪早期微血管形成影響的初步研究.pdf

1、皮膚組織的創(chuàng)傷修復(fù)及再生是燒傷整形外科中常見問題及挑戰(zhàn)，尤其對于軟組織缺損的修復(fù)。目前臨床常用的修復(fù)方法有適用于缺損程度輕微患者的激光治療，但療程長、效果不穩(wěn)定、易有色素沉著；牛膠原、自體膠原蛋白、透明質(zhì)酸等生物材料填充具有操作簡單、損傷小及見效快的優(yōu)點，但對于缺損程度輕微的患者維持時間短暫、費用高和材料滲漏等不足；對于缺損面積較小患者用手術(shù)切除縫合，術(shù)后可能留有明顯瘢痕；能較好改善外形的皮瓣技術(shù)，需要較高的手術(shù)技巧同時存在供區(qū)損傷。自

2、體脂肪相對于其他生物填充材料具有組織相容性好、無異物排異反應(yīng)的優(yōu)勢。作為一種理想的軟組織填充劑的自體顆粒脂肪移植術(shù)具有操作簡單方便、供區(qū)損傷小等優(yōu)點。但是大量研究表明：目前臨床上的非血管化的自體顆粒脂肪移植，早期因有大量的脂肪細胞對缺血、缺氧的耐受力差而死亡，導(dǎo)致中遠期療效很不穩(wěn)定，嚴重影響了這一極具潛力技術(shù)的發(fā)展和進步。因此，如何改善移植脂肪的血供、提高脂肪細胞因?qū)θ毖⑷毖醯哪褪芰统蔀殛P(guān)鍵因素。
　　近期有報道顯示組織固有的

3、干細胞或祖細胞可以向脂肪細胞及內(nèi)皮細胞分化[24]。因此通過增加脂肪來源的間充質(zhì)干細胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs)促進移植物脂肪組織早期細胞增殖和血管化，來提高移植脂肪成活率成為關(guān)注的熱點。尤其是干細胞輔助移植技術(shù)(cell-assisted lipotransfer, CAL)的發(fā)明為更好的應(yīng)用脂肪移植提供了新的思路。脂肪來源的間充質(zhì)干細胞作為種子細胞可廣泛用于輔助移植。但自體ADSCs來源有

4、限、體外培養(yǎng)周期長等原因嚴重限制了其應(yīng)用。有研究表明：異體ADSCs具有低免疫原性，而且能夠誘導(dǎo)免疫耐受[58]。近期在小鼠及兔用同種異體脂肪干細胞輔助顆粒脂肪移植，認為在促進移植物存活及血管化的同時，未見明顯免疫排斥。但異體脂肪干細胞對SD大鼠移植脂肪早期微血管作用如何，具體的作用機制至今未見相關(guān)報道。因此本研究采用異體干細胞輔助自體脂肪移植的方法，在SD大鼠上進行脂肪移植探索性實驗，試圖證明異體干細胞能夠通過提高移植物早期血管化來縮

5、短 SD大鼠脂肪組織缺血缺氧時間，從而提高脂肪移植物的存活率，為后續(xù)的深入研究提供初步的動物實驗數(shù)據(jù)資料和實驗可靠證據(jù)。
　　本實驗首先采用膠原酶消化法進行SD大鼠ADSCs體外分離培養(yǎng)，原代細胞呈長梭狀及漩渦樣生長，混有未貼壁球形或圓形雜細胞；第4代細胞生長較統(tǒng)一，雜細胞少。細胞生長曲線可見第4代ADSCs大約3天進入對數(shù)生長期，同時第10代細胞較第4代生長緩慢。ADSCs誘導(dǎo)多向分化潛能經(jīng)茜素紅染色后可見棕褐色鈣結(jié)節(jié)，油紅O染

6、色可見紅色脂滴。流式細胞儀鑒定免疫表型中CD106、CD45呈陰性，CD34、CD49d呈陽性表達。其次將雄性 SD大鼠32只，按隨機數(shù)字表法分為4組：A組為異體AG（adipose granule, AG），B組為自體AG，C組為自體ADSCs復(fù)合自體AG組，D組為實驗組：異體ADSCs復(fù)合自體AG。將混合好的脂肪移植于SD大鼠背部皮下，于移植后1周分別取出移植脂肪組織，脂肪移植物濕重D(0.35±0.04)、C(0.36±0.03)

7、組與A(0.252±0.04)、B(0.265±0.03)組有比較明顯差異（P＜0.05)；免疫組化CD31陽性細胞數(shù)D(22.08±1.03)、C(20.53±1.07)顯著高于A(7.97±3.61)、B(10.93±1.68)組（P＜0.05）。
　　本研究結(jié)果表明：
　?、? SD大鼠ADSCs體外分離培養(yǎng)取得成功；
　?、?異體ADSCs復(fù)合自體AG在SD大鼠上可提高脂肪移植物的成活率；
　?、?異體脂

8、肪間充質(zhì)干細胞在皮下注射移植脂肪組織中有綠色熒光的分布；
　?、?異體 ADSCs與自體干細胞輔助脂肪顆粒移植一樣能夠促進移植物脂肪早期血管化程度。脂肪濕重上細微差別，仍然具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：①.異體干細胞輔助自體脂肪移植的方法適用于SD大鼠脂肪移植實驗研究；②.異體ADSCs復(fù)合自體AG在SD大鼠上可顯著性提高脂肪移植的成活率；③.其作用機制可能是通過提高移植脂肪組織早期血管化程度，縮短SD大鼠脂肪組織缺血缺氧時間