槲皮素對人角質(zhì)形成細(xì)胞的NF-κB和IL-6下調(diào)作用及機(jī)制.pdf

1、背景:
　　近年研究發(fā)現(xiàn)各種疾病包括銀屑病既與基因?qū)W，也與表觀遺傳學(xué)的改變有關(guān)，生物多酚對表觀遺傳學(xué)的改變是可逆的。調(diào)節(jié)癌癥和自體免疫疾病的表觀遺傳藥物是目前研究的熱點(diǎn)，而目前關(guān)于調(diào)節(jié)癌癥的表觀遺傳藥物研究報(bào)道較多，但有關(guān)銀屑病的這方面研究尚處于起步階段。生物多酚可用于癌癥和自體免疫疾病的預(yù)防和治療，且生物多酚可替代毒性強(qiáng)的藥物和已出現(xiàn)治療耐受的糖皮質(zhì)激素等藥物。銀屑病是由多基因遺傳決定的慢性皮膚病，涉及免疫、炎癥、細(xì)胞增殖與抗凋

2、亡、神經(jīng)介質(zhì)等多方面因素。銀屑病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前認(rèn)為是由遺傳學(xué)改變和表觀遺傳學(xué)改變共同作用。銀屑病的病變特征主要為免疫源性炎癥和角質(zhì)形成細(xì)胞增殖。目前有關(guān)銀屑病的初步報(bào)道表明:銀屑病的發(fā)病與表觀遺傳學(xué)改變密切相關(guān)。IP-10是干擾素-r(INF-r)誘導(dǎo)產(chǎn)生的分子量為10kDa的蛋白質(zhì)，具有前炎癥因子（pro-inflammatory factor）和趨化因子(chemokine)的作用。IP-10不但吸引炎癥細(xì)胞趨向病灶，而且尚可促

3、進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增生。近年報(bào)道銀屑病患者皮損的角質(zhì)形成細(xì)胞的IP-10比血漿的多種細(xì)胞因子，更能反映銀屑病的病情。因此，我們將IP-10誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞作為銀屑病皮損樣角質(zhì)形成細(xì)胞，作為銀屑病治療藥物的的靶細(xì)胞。生物多酚槲皮素可抑制各種腫瘤細(xì)胞的生長，并誘導(dǎo)其分化和凋亡，且槲皮素可抑制白介素-6(IL-6)炎癥因子的產(chǎn)生而顯示一定的抗炎癥效應(yīng)。NF-κB核轉(zhuǎn)錄因子可被應(yīng)激、炎癥、增殖等激活，通過上調(diào)細(xì)胞周期蛋白CyclinD1和細(xì)胞周期

4、進(jìn)展促進(jìn)細(xì)胞增殖。由于槲皮素難溶于水，但脂質(zhì)體槲皮素可溶于水易被細(xì)胞吸收，因此我們制備了納米脂質(zhì)體槲皮素。本研究中心的MTT實(shí)驗(yàn)已表明20ng/ml的IP-10可促進(jìn)正常角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，而40μmol/l的Q或10-7mol/l的D可呈現(xiàn)拮抗作用。因此本研究探討多酚類槲皮素或地塞米松能否通過表觀遺傳修飾抑制IP-10誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞增殖及炎癥的效應(yīng)，并比較地塞米松與槲皮素作用的差異。在此基礎(chǔ)上本實(shí)驗(yàn)擬比較Q或D能否通過下調(diào)p16IN

5、K4α甲基化和HDAC1的表觀遺傳-NF-κB信號途徑而下調(diào)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的NF-κB和IL-6炎癥因子的表達(dá)，進(jìn)一步研究Q或D用藥對IP-10誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和炎癥變化的治療作用，為臨床上治療以角質(zhì)形成細(xì)胞過度增生和炎癥為特征的銀屑病提供新思路。
　　目的:
　　探討納米脂質(zhì)體槲皮素(nanoliposomal quercetin，Q)下調(diào)角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)和白介素-6(IL-6)表達(dá)的表觀遺

6、傳學(xué)修飾效應(yīng)，并與地塞米松（dexamethasone，D）的效應(yīng)進(jìn)行比較。
　　方法:
　　將培養(yǎng)的HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞分為3組:①IP-10+Q組:20ng/mlIP-10+40μmol/lQ②IP-10+D組:20ng/mlIP-10+10-7mol/lD③對照組（C組）:20ng/mlIP-10，三組細(xì)胞均培養(yǎng)48h。對各組細(xì)胞進(jìn)行p16INK4α的甲基化特異PCR(MSP)，將各組細(xì)胞內(nèi)提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行DNMT1

7、，HDAC1，NF-κBp65，CyclinD1，IL-6及P16的免疫印跡并對各組細(xì)胞進(jìn)行HDAC1，IL-6免疫細(xì)胞化學(xué)染色，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3遍。對獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果:
　　與C組相比，p16INK4α的MSP顯示:①組比②組p16INK4α的DNA甲基化減低顯著，P＜0.05;免疫印跡顯示:①組比②組的DNMT1、HDAC1、NF-κBp65、CyclinD1及IL-6的表達(dá)下調(diào)顯著，P16INK