腫瘤細胞中鐵輸出蛋白ferroportin異常調(diào)控的機制研究.pdf

1、分類號：R 7 3 7 ．2 5密 級：學位類別： 科學學位團 專業(yè)學位口學校代碼：學 號：學科門類：l0O622 0 1 0 6 0 1 1 0 6醫(yī)學夭蚌魯科袁垮 警I 矗N J I N 黼￡D I e A | - U 瓣l V E R S l W博士學位論文D o C T o R A L D I S S E R T A T I o N論文題目：腫瘤細胞中鐵輸出蛋白f e r r o p o r t i n 異常調(diào)控的機制研究T I

2、T L E ：T h e m o l e c u l a r m e c h a n i s mu n d e r l y i n g d e r e g u l a t i o no fi r o ne x p o r t e r f e r r o p o r t i ni nt u m o r s一級學科：臨床醫(yī)學二級學科：外科學泌尿外論文作者：陳岳指導教師：徐勇教授導師組成員：劉思金研究員張志宏教授天津醫(yī)科大學研究生院二。一三年

3、五月天津醫(yī)科大學博士學位論文中文摘要目的探討f e r r o p o r t i n 異常表達在前列腺癌和乳腺癌細胞增殖中的作用，并進一步明確其調(diào)節(jié)的分子機制。方法通過q R T - P C R 和W e s t e mb l o t 檢測f e r r o p o r t i n 在乳腺癌組織中的m R N A 和蛋白表達水平，構(gòu)建f e r r o p o r t i n 高表達質(zhì)粒，應(yīng)用f e r r o p o r t i n

4、 高表達質(zhì)粒和f e r r o p o r t i n 特異性s h R N A 轉(zhuǎn)染前列腺癌P C 3 細胞和乳腺癌M D A ．M B ．2 3 1 細胞，建立f e r r o p o r t i n 穩(wěn)定高、低表達的腫瘤細胞系，運用細胞計數(shù)、M T T 和B r d U 等方法檢測f e r r o p o r t i n 異常表達對腫瘤細胞增殖的影響，克隆形成實驗檢測其對腫瘤形成能力的作用，并通過構(gòu)建腫瘤動物模型對體外實驗結(jié)

5、果進行驗證；為了探討f e r r o p o r t i n 異常表達的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機制，我們通過文獻檢索、網(wǎng)絡(luò)軟件和基因芯片等手段，對f e r r o p o r t i n 啟動子3 ．0k b 區(qū)域進行預(yù)測并選定N r f 2 和M Z F 一1 作為研究對象，應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)檢測N r f 2 、M Z F 一1 與f e r r o p o r t i n 啟動子的相互作用，然后構(gòu)建含有或不含N r f 2 、M Z

6、F ．1 結(jié)合位點的l u c i f e r a s e 報告基因質(zhì)粒，通過l u c i f e r a s e 報告基因?qū)嶒灧治霾煌Y(jié)合位點在轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)f e r r o p o r t i n表達中的作用，并運用組織篩查和特異性s i R N A 沉默技術(shù)，對結(jié)果進一步驗證；我們應(yīng)用M Z F ．1 高表達質(zhì)粒和M Z F ．1 特異性s i R N A 轉(zhuǎn)染P C 3 細胞，通過細胞計數(shù)、M T T 、B r d U 和細胞活力

7、檢測等方法檢測M Z F ．1 異常表達對腫瘤細胞增殖的影響，然后利用網(wǎng)絡(luò)工具分別對M Z F ．13 ’U T R 區(qū)域和啟動子3 ．0 k b 區(qū)域進行預(yù)測，尋找可能的m i R N A s 和轉(zhuǎn)錄因子； m i R - 4 9 2m i m i c 轉(zhuǎn)染P C 3 細胞后，細胞計數(shù)、M T T 和B r d U 檢測細胞增殖能力，W e s t e m b l o t 檢測M Z F ．1 蛋白表達水平，構(gòu)建M Z F —l 3

8、’U T R 的l u c i f e r a s e 報告基因質(zhì)粒，通過l u c i f e r a s e 報告基因?qū)嶒灧治鰉 i R - 4 9 2 對M Z F 一1 的調(diào)節(jié)；我們利用A P 4 、c ．M y b 特異性s i R N A 技術(shù)，通過q R T - P C R 和W e s t e r n b l o t 檢測M Z F ．1 的m R N A 和蛋白表達水平，然后應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀實驗明確A P 4 、c