雷公藤紅素對(duì)腫瘤細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子-1α及荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的：缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α是惡性腫瘤發(fā)生的一個(gè)重要因子，本文探討雷公藤紅素對(duì)人肝癌細(xì)胞Hep3B中HIF-1α活化的影響，為雷公藤紅素抗腫瘤藥物的開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：肝癌細(xì)胞Hep3B、宮頸癌細(xì)胞Hela、胃癌細(xì)胞SK-Hep1給予不同濃度的雷公藤紅素（Celastrol）并缺氧誘導(dǎo)箱中孵育，蛋白免疫印跡（Western Blot）檢測(cè)雷公藤紅素（Celastrol）對(duì)HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性的影響；氯化鈷（CoCl2）

2、模擬Hep3B缺氧模式，Western Blot法證明雷公藤紅素對(duì)Hep3B中HIF-1α的活化的影響；蛋白質(zhì)合成抑制劑（Cycloheximide）和蛋白質(zhì)降解抑制劑（MG-132）等方法來檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)Hep3B中HIF-1α合成和降解的影響；通過反轉(zhuǎn)錄鏈?zhǔn)骄郏≧T-PCR）反應(yīng)檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)HIF-1α下游靶基因血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），EPO
　　mRNA的表達(dá)水平的影響；雙熒光素酶報(bào)告基因法（Luciferase

3、）檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)Hep3B-HRE中HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性的影響；噻唑藍(lán)比色分析法（MTT）檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)Hep3B增殖的影響；細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)（in vitro invasion）檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)Hep3B侵襲和轉(zhuǎn)移的影響；將宮頸癌細(xì)胞移植裸鼠皮下，建立裸鼠皮下移植瘤模型，灌胃給予不同劑量的雷公藤紅素，觀察雷公藤紅素對(duì)裸鼠接種腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的影響及在中對(duì)裸鼠組織中HIF-1α的影響并繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線；采用蛋白免疫印跡法驗(yàn)證雷公藤紅素

4、對(duì)裸鼠體內(nèi)組織中HIF-1α活性的影響；
　　結(jié)果：雷公藤紅素呈劑量依賴性抑制了缺氧模式下的Hep3B、Hela、SK-Hep1中HIF-1α的表達(dá)水平；雷公藤紅素呈劑量依賴性抑制了COCl2模擬Hep3B缺氧中HIF-1α的表達(dá)水平；雷公藤紅素對(duì)Hep3B中HIF-1α的合成有抑制作用，并具有時(shí)間依賴性抑制，但對(duì)其降解不影響；雷公藤紅素呈劑量依賴性抑制了Hep3B中VEGF、EPO mRNA的表達(dá)水平；MTT法和Lucifera

5、se說明雷公藤紅素對(duì)Hep3B的增殖基本沒有影響并具有藥物活性；通體體外侵襲實(shí)驗(yàn)說明雷公藤紅素呈劑量依賴性抑制了Hep3B的侵襲和轉(zhuǎn)移的能力；雷公藤紅素對(duì)裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)呈明顯的抑制作用，并呈現(xiàn)劑量依賴性的抑制，同時(shí)對(duì)裸鼠的心，對(duì)肝臟，脾，肺腎，實(shí)體腫瘤組織中HIF-1α蛋白質(zhì)均呈現(xiàn)出劑量依賴性的抑制。
　　結(jié)論：雷公藤紅素具有抗腫瘤作用，對(duì)HIF-1α的合成有作用但對(duì)HIF-1α的降解不起作用，從而從新的視覺闡明腫瘤發(fā)生發(fā)展