TGF-β1對(duì)HSC活化及阻斷機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）參與肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells，HSCs)活化所涉及的機(jī)制，以及使用SB203580阻斷TGF-β1通路后肝星狀細(xì)胞活化的轉(zhuǎn)歸，進(jìn)一步揭示肝纖維化的發(fā)病機(jī)制，為肝纖維化臨床治療尋求新思路。
　　 方法:體外培養(yǎng)HSC-T6細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分組進(jìn)行培養(yǎng)。將培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞系中分為TG

2、F-β1組及阻斷劑組。TGF-β1組分別加入濃度為3.0μg/L及6.0μg/LTGF-β1，阻斷劑組加入3.0μg/LTGF-β1以及濃度為10μmol/L和20μmol/L的P38MAPK阻斷劑(SB203580)培養(yǎng)48h。使用高效液相色譜法(highperformance liquid chromatography，HPLC)測(cè)定相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液中非對(duì)稱性二甲基精氨酸(asymmetric dimethy larginine，A

3、DMA)的含量，HPLC測(cè)定細(xì)胞凍融液代謝ADMA的能力，反映二甲基精氨酸-二甲胺水解(dimethylargin-inedimethylaminohydrolase，DDAH)的活性;逆轉(zhuǎn)錄-PCR(RT-PCR)法檢測(cè)加入阻斷劑之前與之后肝星狀細(xì)胞DDAH1 mRNA表達(dá)水平，進(jìn)一步研究TGF-β1對(duì)HSC的激活作用是否與DDAH/ADMA通路有關(guān)以及加入阻斷劑后DDAH1mRNA相應(yīng)的變化。
　　 結(jié)果:1、RT-PCR法

4、檢測(cè)肝星狀細(xì)胞中DDAH1 mRNA的變化，可發(fā)現(xiàn)DDAH1mRNA表達(dá)隨TGF-β1濃度升高而降低，加入阻斷劑后表達(dá)逐步增高。2、利用高效液相色譜法發(fā)現(xiàn)，隨著阻斷劑濃度的增加，DDAH1活性逐漸增高，ADMA合成逐漸減少。3、加入SB203580組抑制TGF-β1信號(hào)傳導(dǎo)通路及TGF-β1表達(dá)，上調(diào)DDAH1 mRNA表達(dá)，降低纖維化發(fā)生。
　　 結(jié)論:1、TGF-β1對(duì)活化的HSC存在較強(qiáng)的活化作用。2、在肝星狀細(xì)胞中存在D