雌性大鼠骨髓干細(xì)胞離體從頭合成雌二醇的研究.pdf

1、目的:
　　 研究雌性大鼠骨髓干細(xì)胞(female bone marrow stem cells,FBMSCs)在含10％胎牛血清的高糖DMEM離體培養(yǎng)條件下細(xì)胞形態(tài)的變化,檢測能否分化為產(chǎn)生雌二醇(estradiol,E2)及表達(dá)芳香化酶(aromatase,P450arom)的性激素生成細(xì)胞,為卵巢早衰、老年人骨質(zhì)疏松癥等疾病的治療提供新的可能途徑。
　　 方法:
　　 全骨髓貼壁法分離成年雌性SD大鼠的骨髓

2、干細(xì)胞,用含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)增殖,傳代至第3代,加或不加全反式視黃酸(all-trans retinoic acid,ATRA)誘導(dǎo)分化,分為對(duì)照組(不加ATRA)和ATRA組(加ATRA10-5mol/L),觀察兩組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)/酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測兩組細(xì)胞培養(yǎng)液中E2、睪酮(te

3、stosterone,T)/雄烯二酮(androstenedione,ASD)的濃度；RT-PCR檢測兩組細(xì)胞中芳香化酶基因CYP19 mRNA的表達(dá)和FSHR mRNA的表達(dá)；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測兩組細(xì)胞中芳香化酶蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.離體培養(yǎng)的第3代雌性大鼠骨髓干細(xì)胞,主要表現(xiàn)為大小均一、梭形的貼壁細(xì)胞。
　　 2.DMEM高糖培養(yǎng)基加胎牛血清培養(yǎng)第3代雌性大鼠骨髓干細(xì)胞,RT-PCR示對(duì)照組

4、和ATRA組從培養(yǎng)第1天開始均表達(dá)合成雌二醇的關(guān)鍵酶芳香化酶CYP19 mRNA和顆粒細(xì)胞標(biāo)志基因FSHR mRNA,免疫細(xì)胞化學(xué)示兩組細(xì)胞從培養(yǎng)第2天到第4天都有芳香化酶蛋白的表達(dá),陽性細(xì)胞呈簇狀分布,形態(tài)呈多角形或梭形,細(xì)胞核呈卵圓形,染深藍(lán)色。從培養(yǎng)1天開始在兩組細(xì)胞培養(yǎng)液中都檢測到較高水平的E2。
　　 3.對(duì)照組和ATRA組都能產(chǎn)生T和ASD,提示雌性大鼠骨髓干細(xì)胞在離體培養(yǎng)條件下能從頭合成E2。
　　 結(jié)論: