自體骨髓干細(xì)胞移植對(duì)大鼠缺血后肢側(cè)支循環(huán)影響的研究.pdf

1、目的:將非純化的骨髓細(xì)胞懸液和純化的骨髓干細(xì)胞懸液分別移植于清潔級(jí)近交雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠缺血的后肢，觀察移植后SD大鼠體內(nèi)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)變化以及對(duì)缺血后肢血管新生的影響，探討骨髓干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病的價(jià)值以及兩種移植方法的優(yōu)劣，為臨床治療下肢缺血性疾病提供理論基礎(chǔ)。
　　方法: SD大鼠30只，隨機(jī)分為3組：實(shí)驗(yàn)1組（n=10）：非純化的骨髓細(xì)胞懸液移植組。實(shí)驗(yàn)2組（n=10）

2、：純化的骨髓干細(xì)胞移植組；對(duì)照組（n=10）：同法僅注射等量的PBS；先后穿刺SD大鼠雙側(cè)股骨和脛骨的骨髓腔各一次，四次抽取骨髓液1ml，第1組制成濾過的骨髓液0.8ml。第2組抽取骨髓液0.8ml，加入PBS液，獲骨髓細(xì)胞懸浮液，用密度梯度離心法獲得純化的骨髓干細(xì)胞，用PBS重懸制成干細(xì)胞懸液0.8ml；實(shí)驗(yàn)性SD大鼠后肢動(dòng)脈缺血模型，采用楊盛家報(bào)道方法來構(gòu)建，模型成功建立后，立刻行骨髓細(xì)胞移植，術(shù)后4周，分別通過RT-PCR法和EL

3、ISA法來測(cè)定缺血區(qū)股部肌肉勻漿VEGF mRNA的表達(dá)情況和血清血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）處在哪個(gè)水平，激光多普勒血流儀測(cè)定皮膚微循環(huán)灌注量并進(jìn)行肢體功能評(píng)分；
　　結(jié)果:（1）激光多普勒血流測(cè)定儀檢測(cè)下肢血流改善情況：移植后4周，雙側(cè)后肢的皮膚灌注量之差，實(shí)驗(yàn)1組為14.1±6.6，實(shí)驗(yàn)2組為19.9±7.2，對(duì)照組為31.4±9.6，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；實(shí)驗(yàn)1組的雙側(cè)后肢皮膚灌注

4、量之差較實(shí)驗(yàn)2組皮膚灌注量之差減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　?。?）評(píng)估肢體的功能和對(duì)照相比較，兩組實(shí)驗(yàn)組在術(shù)后2周右后肢肢體功能評(píng)分都沒有明顯的差異(P>0.05)，不過對(duì)于術(shù)后3周和4周的情形其差異就比較明顯(P<0.05)，治療組顯示出較好的肢體功能活動(dòng)，且術(shù)后4周，治療1組功能評(píng)分高于治療2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，
　?。?）各組大鼠血清中VEGF含量和肌肉勻漿中VEGF mRNA檢測(cè)結(jié)果

5、的比較術(shù)后4周，兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物血清中VEGF含量較對(duì)照組明顯升高，并且實(shí)驗(yàn)1組動(dòng)物血清中VEGF含量高于實(shí)驗(yàn)2組動(dòng)物，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組后肢肌肉勻漿VEGF mRNA的表達(dá)較對(duì)照組明顯增高（P<0.05），實(shí)驗(yàn)1組肌肉VEGF mRNA的表達(dá)高于實(shí)驗(yàn)2組（P<0.05）.
　　結(jié)論:
　　1.非純化的骨髓細(xì)胞和純化的骨髓干細(xì)胞分別移植治療大鼠后肢缺血是有效的。VEGF表達(dá)水平與缺血后肢側(cè)支循環(huán)的建