羅格列酮對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠的保護(hù)作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、目的：過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體Y(peroxisomeproliferator-activatedreceptor-γ，PPARy)屬核受體超家族成員，包含有轉(zhuǎn)錄因子可調(diào)控基因表達(dá)，已經(jīng)認(rèn)識(shí)到PPAR~在脂質(zhì)代謝、胰島素敏感性和細(xì)胞凋亡中起重要作用。新近，PPARy在免疫反應(yīng)，尤其在炎癥調(diào)控方面的研究日益增多。本課題探討PPARy高選擇性激動(dòng)劑羅格列酮對(duì)重癥急性胰腺炎(severeacutepancreatitis，SAP)大鼠的保護(hù)

2、作用，及其對(duì)SAP繼發(fā)肝損害和高血糖時(shí)的作用機(jī)制。 方法：健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠72只，體重280-~：20g，隨機(jī)分為假手術(shù)組(對(duì)照組)，重癥急性胰腺炎組(模型組)和羅格列酮預(yù)處理組(干預(yù)組)，每組24只。采用4％水合氯醛(1Oml／kg)腹腔注射麻醉，逆行胰膽管注射5％?；悄懰徕c(1ml／kg)建立SAP模型。干預(yù)組在造模前l(fā)h腹腔注射1％羅格列酮(1ml／kg)。分別于術(shù)后3h、6h和12h3個(gè)時(shí)

3、段采用腹主動(dòng)脈放血法將大鼠分批處死(每組各時(shí)段8只)，獲取血清檢測(cè)血清淀粉酶、血糖和谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平。取胰腺組織，分為四份：①石蠟切片常規(guī)HE染色，進(jìn)行胰腺組織鏡下病理評(píng)分；②測(cè)定胰腺組織含水量；③檢測(cè)胰腺組織中MPO、iNOS和NO活性；④運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)胰腺組織中PPAR~mRNA、iNOSmRNA的表達(dá)。取肝臟組織，分為三份：①石蠟切片常規(guī)HE染色，進(jìn)行肝臟組織鏡下病理評(píng)分，NF．KB的表達(dá)采用免疫組化

4、技術(shù)S-P法檢測(cè)；②檢測(cè)肝臟組織中MPO、iNOS和NO活性；③RT-PCR法檢測(cè)肝臟組織中PPAR~mRNA、iNOSmRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1．逆行胰膽管注射5％?；悄懰徕c誘導(dǎo)大鼠SAP，制模后3h出現(xiàn)明顯的胰腺病理?yè)p傷，伴血清淀粉酶升高，胰腺組織含水量增加，胰腺組織中MPO水平升高，iNOSmRNA表達(dá)未明顯增加。隨著制模時(shí)間延長(zhǎng)，胰腺損傷逐漸加重。模型組6h，胰腺組織中iNOSmRNA表達(dá)、MPO、iNOS和N

5、O水平較對(duì)照組6h顯著升高(P<0．01)。制模后12h胰腺組織病理?yè)p傷最嚴(yán)重(P<0．01)，此時(shí)組織中iNOSmRNA表達(dá)、MPO和iNOS活性至最高峰，但NO水平較模型組6h有所下降。胰腺組織中PPAR~在模型組各時(shí)段均未見(jiàn)明顯活化。 2．干預(yù)組胰腺組織中PPAR~mRNA表達(dá)在3h明顯增加，6h達(dá)最高峰，單次劑量至12h仍持續(xù)表達(dá)。6h和12h胰腺組織中iNOSmRNA表達(dá)、iNOS和NO水平與同時(shí)段模型組比較均明顯下降

6、(除干預(yù)組6hiNOSmRNA表達(dá)與模型組6h比較P<0．05外，其余P<0．01)。12h，干預(yù)組胰腺組織MPO活性較模型組顯著下降(P<0．01)，胰腺組織病理?yè)p傷較模型組12h減輕(P<0．05)。 3．肝臟組織中NF-KB表達(dá)在模型組3h即可見(jiàn)明顯活化，至6h持續(xù)活化，并在12h達(dá)到峰值。肝組織中iNOSmRNA表達(dá)遲于NF-KB的活化，在模型組6h開(kāi)始表達(dá)，iNOSmRNA表達(dá)和iNOS生成呈同步變化，伴隨著NO水平的

7、迅速上升，三者在12h均較對(duì)照組顯著升高(P<0．01)，ALT和MPO水平亦較6h明顯升高。肝組織病理?yè)p害在12h最明顯，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0．01)。肝組織中PPAR~在模型組各時(shí)段均未見(jiàn)明顯活化。 4．干預(yù)組肝臟組織中PPARymRNA表達(dá)在3h明顯增加，6h達(dá)最高峰，單次劑量至12h仍持續(xù)表達(dá)。干預(yù)組肝組織中NF．KB表達(dá)的變化趨勢(shì)與模型組相似，但各干預(yù)組NF．KB表達(dá)均低于同時(shí)段模型組，兩者比較有顯著性差異

8、(P<0．01)。干預(yù)組6h、12h肝組織中iNOSmRNA表達(dá)、iNOS、NO、MPO和ALT水平均較同時(shí)段模型組下降，以12h最為顯著(P<0．01)。12h，干預(yù)組肝臟組織病理?yè)p傷較模型組減輕(P<0．01)。 5．模型組和干預(yù)組各時(shí)段血糖水平均明顯升高，與同時(shí)段對(duì)照組比較均有顯著性差異(P<0．01)。干預(yù)組各時(shí)段血糖水平較模型組均有下降，以干預(yù)組12h最為明顯(P<0．01)。干預(yù)組大鼠血糖雖然沒(méi)有控制到正常范圍，但3

9、h、6h和12h的血糖水平較穩(wěn)定。 結(jié)論： 1．羅格列酮通過(guò)活化PPARy途徑，抑制胰腺組織中iNOSmRNA表達(dá)及iNOS生成，減少NO過(guò)量生成，減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，從而減輕SAP時(shí)胰腺病理?yè)p害。 2．羅格列酮通過(guò)活化PPAR,／途徑，抑制肝臟組織中NF-KB表達(dá)，iNOSmRNA表達(dá)下降，iNOS生成減少，MPO、NO和ALT水平顯著降低，減少中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕SAPl2h肝臟病理?yè)p害。 3．羅格列