細(xì)胞外信號(hào)調(diào)控激酶在鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯誘導(dǎo)的大鼠泌尿生殖畸形發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、背景:尿道下裂(Hypospadias)和隱睪(Cryptorchidism)是先天性泌尿外生殖器畸形中最常見的兩種疾病，其發(fā)病率高，在近年來還有繼續(xù)增高的趨勢(shì)。這兩種疾病均需要手術(shù)治療，而手術(shù)治療效果并不理想，易產(chǎn)生手術(shù)并發(fā)癥，或者術(shù)后仍不能完全恢復(fù)功能。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，大鼠孕期暴露于DEHP可致仔代雄性大鼠發(fā)生尿道下裂及隱睪。本研究在前期研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，將進(jìn)一步探索尿道下裂及隱睪的發(fā)病機(jī)制，為進(jìn)一步預(yù)防尿道下裂及隱睪的發(fā)生提

2、供理論依據(jù)。
　　目的:在鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯[di-(2-ethylhexyl) phthalate，DEHP]誘導(dǎo)的大鼠先天性生殖畸形模型上，研究細(xì)胞外信號(hào)調(diào)控激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)在DEHP暴露后的胎鼠陰莖、睪丸中的表達(dá)變化，初步探討先天性泌尿生殖畸形發(fā)生機(jī)制。
　　方法:將SD孕鼠隨機(jī)分為DEHP組(750 mg/kg體重/d)和大豆油對(duì)照組

3、，每組20只，各組分別于母鼠孕期12～19 d(gestation day，GD12～19)持續(xù)經(jīng)口灌注給藥。各組分別取10只孕鼠讓其正常分娩，并計(jì)數(shù)每窩產(chǎn)雄性活仔鼠數(shù)量;出生后1/3/7/14/21/30日齡(postnatalday，PND)時(shí)稱取雄性仔鼠體重并測(cè)量肛門生殖器距離(anogenitaldistance，AGD);30日齡時(shí)逐個(gè)檢查尿道下裂及隱睪的發(fā)生情況。余孕鼠在GD20行剖宮產(chǎn)取雄性胎鼠，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(

4、qPCR)和免疫組化方法分別檢測(cè)胎鼠陰莖組織、睪丸組織中ERK1、ERK2的mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:DEHP組10只孕鼠共產(chǎn)仔82只，其中雄性39只;對(duì)照組10只孕鼠共產(chǎn)仔119只，其中雄性62只，組間比較，每窩活產(chǎn)仔數(shù)及活產(chǎn)雄性仔鼠數(shù)，DEHP組均較對(duì)照組明顯減少(P＜0.01)。各日齡動(dòng)態(tài)觀察雄性仔鼠，PND1 DEHP組雄性仔鼠體重及AGD分別為6.32±0.60 g3.91±0.57mm，對(duì)照組分別為6.95±

5、0.14g、4.67±0.20mm;PND3 DEHP組雄性仔鼠體重及AGD分別為8.11±0.95 g5.42±0.67mm，對(duì)照組分別為9.98±0.29g、6.02±0.27mm; PND7 DEHP組雄性仔鼠體重及AGD分別為14.02±2.39 g、6.76±0.73 mm，對(duì)照組分別為18.78±0.23g、8.43±0.46mm; PND14 DEHP組雄性仔鼠體重及AGD分別為27.03±3.01 g、10.20±0.8

6、0 mm，對(duì)照組分別為32.98±0.69g、12.05±0.40 mm; PND21 DEHP組雄性仔鼠體重及AGD分別為42.48±4.61g、15.14±1.17 mm，對(duì)照組分別為52.33±1.39g、18.16±0.73mm;PND30 DEHP組雄性仔鼠體重及AGD分別為66.08±8.67g、20.88±1.36 mm，對(duì)照組分別為84.82±7.56g、23.73±1.09mm。各日齡雄性仔鼠組間比較，DEHP組體重及

7、AGD均較對(duì)照組明顯減小(P＜0.01)。PND30檢查仔鼠，DEHP組發(fā)生尿道下裂11只，發(fā)生率約為28.2％，對(duì)照組無尿道下裂發(fā)生，組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);DEHP組發(fā)生隱睪20只，發(fā)生率為51.3％（其中單側(cè)隱睪10.3％，雙側(cè)隱睪41.0％），對(duì)照組無隱睪發(fā)生，組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。免疫組織化學(xué)方法觀察，實(shí)驗(yàn)組胎鼠陰莖組織中磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組有增加趨勢(shì)，總

8、ERK(T-ERK)兩組無明顯差異。qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，ERK1和ERK2二者mRNA在正常大豆油對(duì)照組相對(duì)于內(nèi)參GAPDH的表達(dá)分別是0.82±0.13和1.32±0.33，在DEHP灌胃的實(shí)驗(yàn)組其相對(duì)表達(dá)分別是1.09±0.18和1.81±0.22，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組的ERK1和ERK2 mRNA表達(dá)水平均顯著增高(P＜0.05)。胎鼠睪丸組織免疫組織化學(xué)方法觀察，p-ERK及T-ERK在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組無明顯差異。
　　結(jié)