15d-PGJ2促進HBx陽性肝細胞的凋亡.pdf

1、目的：構(gòu)建轉(zhuǎn)基因細胞模型HL7702-HBx，觀察HBx基因?qū)L7702細胞增殖、周期和凋亡的影響，應(yīng)用藥物15d-PGJ2作用HL7702-HBx細胞及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組HL7702-NC細胞，觀察細胞增殖、周期和凋亡的改變，探討15d-PGJ2在誘導(dǎo)細胞凋亡的作用機制和意義。
　　方法：應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和G418篩選構(gòu)建穩(wěn)定表達HBx的轉(zhuǎn)基因細胞HL7702-HBx細胞，RT-PCR和Western blot鑒定HBx mRNA與蛋

2、白的表達。分別以四唑藍（MTT）比色法、流式細胞術(shù)檢測HL7702-HBx細胞及對照組HL7702-NC細胞及應(yīng)用藥物15d-PGJ2作用后的HL7702-HBx細胞、HL7702-NC細胞的增殖、周期和凋亡。Western blot檢測各組細胞中凋亡信號通路Akt、NF-κB、Caspase-3、Bax、Bcl2等蛋白的表達。
　　結(jié)果：HL7702-HBx細胞中有HBx mRNA和蛋白的表達，細胞增殖快與對照組HL7702-N

3、C細胞有顯著差別（P<0.05）；流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)HL7702-HBx細胞凋亡率顯著降低，細胞周期分布顯示其G0/G1期細胞比例減少，S期細胞比例明顯增加。應(yīng)用藥物15d-PGJ2作用后，兩株細胞的增長均受到抑制，抑制率隨藥物濃度增大而升高；進行流式檢測后發(fā)現(xiàn)，兩株細胞的凋亡率均顯著增加，周期分布均表現(xiàn)為G0/G1期細胞比例顯著增加，S期細胞比例顯著降低。這些變化均以HL7702-HBx細胞改變的更顯著。細胞中凋亡信號通路Akt、NF

4、-κB、Caspase-3、Bax、Bcl2等蛋白的表達存在顯著變化。
　　結(jié)論：HBx基因通過可促進細胞膜受體凋亡相關(guān)蛋白Akt、NF-κB的表達，從而抑制細胞凋亡。在線粒體凋亡通路中，HBx基因促進Bax表達而抑制Bcl2表達，可促進細胞凋亡。這表現(xiàn)了HBx基因?qū)Φ蛲龅碾p向調(diào)節(jié)作用。應(yīng)用藥物15d-PGJ2作用后，HL7702-HBx細胞和HL7702細胞均表現(xiàn)出了促凋亡蛋白的表達增加，抑制凋亡蛋白的表達減少，這種改變，在HL