咖啡因影響HBx(+)肝細胞合成PGE2的特點及機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  咖啡是一種常見的飲品,其主要成份咖啡因的各種生物學活性作用也被廣泛研究,特別是在疾病的防治方面被認為有積極作用。不斷有研究顯示飲用咖啡能夠減低肝癌發(fā)生的風險。PGE2為環(huán)加氧酶合成的最具生物學活性的重要產(chǎn)物之一,研究證明惡性腫瘤組織中PGE2水平明顯增高,能夠促進腫瘤細胞生長。因此,抑制PGE2的產(chǎn)生也成為防止炎癥向癌癥轉(zhuǎn)變的一種有價值的研究方向。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多可以減少細胞產(chǎn)生 PGE2的藥物或化合物,它們可通過破壞

2、PGE2產(chǎn)生過程中的各種酶或影響其基因表達來實現(xiàn)。本研究通過觀察咖啡因?qū)Ω渭毎闔L7702、HL7702-HBx、HepG2和HepG2-HBx肝細胞增殖的影響,探討咖啡因影響HBx(+)肝細胞合成PGE2的特點及機制。
  方法:
  構(gòu)建表達HBx的肝細胞株HL7702-HBx和HepG2-HBx;采用四唑藍比色法觀察咖啡因?qū)Bx(+)肝細胞生長的影響、ELISA法比較咖啡因影響HBx(+)和HBx(-)肝細胞株細胞

3、中分泌 PGE2的差異、 Western blot檢測咖啡因影響 PGE2分泌的PPARγ-EGR1-mPGES-1軸相關(guān)蛋白的表達以及采用熒光報告分析咖啡因?qū)Bx(+)肝細胞COX-2和mPGES-1啟動子活性的影響。
  結(jié)果:
  咖啡因?qū)λ闹昙毎脑鲋骋种谱饔镁S著藥物的濃度增加而增加,在800μM濃度時最明顯(P<0.05);咖啡因?qū)λ闹昙毎囊种谱饔迷诩铀幒蟮?天就開始起作用,具有濃度依賴性和時間依賴性。咖啡因

4、對HL7702-HBx和HepG2-HBx細胞的抑制作用在800μM和加藥7天時效果最為明顯,均顯著高于HL7702和HepG2細胞(P<0.05)??Х纫颍?00μM)作用后的1、4、7天后,四株細胞分泌PGE2的量均逐漸減少(P<0.05),咖啡因?qū)L7702-HBx和HepG2-HBx細胞分泌的PGE2抑制作用幅度高于HL7702和HepG2細胞。Western-blot檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)咖啡因?qū)λ闹昙毎鸆OX2蛋白表達的影響不明顯(

5、P>0.05);而四株細胞在加咖啡因情況下 mPGES-1的蛋白表達明顯低于不加咖啡因組(P<0.05),且加咖啡因后HL7702-HBX和HepG2-HBx細胞株mPGES-1的蛋白表達明顯低于HL7702和HepG2細胞株。四株細胞在咖啡因存在情況下,檢測瞬時轉(zhuǎn)染mPGES-1及COX-2的啟動子報告基因48小時后的熒光活性,發(fā)現(xiàn)四株細胞的COX-2啟動子轉(zhuǎn)錄活性對于加藥與不加藥的影響變化不大(P>0.05);而對于mPGES-1啟

6、動子活性,四株細胞在加藥情況下比不加藥情況下明顯下調(diào)(P<0.05),且加藥后HL7702-HBx和HepG2-HBx細胞株mPGES-1啟動子活性較HL7702和HepG2細胞株下降更明顯(P<0.05)。在咖啡因的作用下,肝細胞的mPGES-1和EGR1蛋白表達均下調(diào),PPARγ蛋白表達上調(diào),而HBx(+)肝細胞的這些指標變化更顯著(P<0.05)。
  結(jié)論:
  咖啡因在HBx(+)肝細胞中可以通過EGR1影響mPG

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