實時熒光定量檢測端粒酶活性及相應(yīng)標(biāo)志物免疫組化分析在肺癌診斷中的綜合應(yīng)用.pdf

1、肺癌的預(yù)后取決于早期篩查、早期診斷以及早期、有效的治療,細胞病理學(xué)檢測是肺癌早期診斷、疾病分期和療效監(jiān)測的重要手段。但由于靈敏性尚難以達到人們對肺癌早期診斷的要求,一直困撓著臨床。挖掘更靈敏的標(biāo)志物和更簡便快捷的檢測方法,成為研究熱點之一。研究表時幾乎所有人肺癌細胞株及大多數(shù)肺癌組織均有端粒酶的表達,并隨腫瘤發(fā)展階段呈進行性升高趨勢,提示端粒酶活性在肺癌的發(fā)生及腫瘤的發(fā)展中有著重要的作用。本研究利用熒光標(biāo)記的置換探針(displacin

2、g probe)建立一種實時熒光-端粒酶重復(fù)擴增(TRAP)法,并應(yīng)用于肺癌細胞系、肺癌冰凍組織和臨床體液樣本。結(jié)果顯示,實時熒光TRAP法具有簡便、快速、靈敏、精確的優(yōu)勢,其靈敏性可達到0.5％。對83例肺癌組織和20例肺良性病變樣本的檢測結(jié)果表明,端粒酶活性是鑒別肺良、惡性病變的可靠指標(biāo)。端粒酶活性在不同肺癌組織學(xué)類型之間具有顯著差異,復(fù)合型小細胞癌活性較高,鱗癌和腺鱗癌次之,腺癌的端粒酶活性較低。此外端粒酶活性與肺癌組織學(xué)類型及腫

3、瘤分化程度呈相關(guān)性。復(fù)合型小細胞癌活性較高,鱗癌和腺鱗癌次之,腺癌的端粒酶活性較低。腫瘤分化程度越低,端粒酶活性越高。可見使用靈敏的實時熒光PCR定量檢測端粒酶活性可作為肺癌診斷重要輔助手段,特別是對于可疑的病例,端粒酶檢測是鑒別診斷和監(jiān)測療效的有效方法。
　　 人端粒酶活性是由其逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcnptase,hTERT)催化亞基在轉(zhuǎn)錄水平進行調(diào)控,迄今為止在其逆轉(zhuǎn)錄酶基序

4、(motif)已發(fā)現(xiàn)3個主要的缺失剪接位點。這些缺失體的表達水平及其對端粒酶活性的影響尚未完全闡明。本研究利用特異的置換探針,對肺癌細胞系和冰凍肺癌組織的hTERT'及其缺失體的表達進行實時定量檢測。4種肺癌細胞系均具有不同水平的端粒酶活性和hTERT轉(zhuǎn)錄體的表達。83例肺癌組織樣本檢測出不同表達水平的hTERT總轉(zhuǎn)錄體,相對表達量在0.35-647之間(中位值=9.30),但與端粒酶活性TPG值之間未見統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。此外,我們還對46

5、例胸腔積液和23例支氣管肺泡灌洗液樣本進行端粒酶活性檢測,并與常規(guī)涂片法的細胞學(xué)診斷做對比,同時利用剩余沉淀細胞進行瓊脂-石蠟雙包埋和免疫組織化學(xué)染色以進一步校正診斷。在48例細胞學(xué)診斷明確的樣本中,有43例(89.58％)樣本的端粒酶活性檢測結(jié)果與細胞學(xué)診斷相一致。在利用免疫組化標(biāo)記和綜合臨床病理資料的基礎(chǔ)上,對細胞學(xué)診斷(特別是可疑病例)進行校正后,端粒酶活性檢測的敏感性為82.14％,特異性為95.24％,若將細胞學(xué)診斷與端粒酶活