COX-2與新生鼠腦缺氧缺血的相關性研究及選擇性COX-2抑制劑的應用.pdf

1、新生兒缺氧缺血性腦損傷(HIBD)是造成新生兒死亡和兒童永久性神經(jīng)功能障礙的常見原因。其發(fā)病機制尚不完全清楚，因此缺乏有效的防治手段。最近的許多研究提示了環(huán)氧合酶2(COX-2)在HIBD發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。但其作用時相及表達方式尚不清楚。 本實驗采用新生鼠HIBD模型，通過免疫組化方法測定其在HIBD發(fā)生發(fā)展過程中的表達，并應用選擇性COX-2抑制劑NS398進行干預，觀察COX-2免疫細胞化學陽性數(shù)、海馬CA1區(qū)神經(jīng)元

2、數(shù)及神經(jīng)細胞凋亡數(shù)表達變化，了解HIBD發(fā)生發(fā)展過程中COX-2的在神經(jīng)細胞中的表達及時相上的變化，以進一步明確COX-2與HIBD之間的相互作用，并在不同時相及劑量給予選擇性COX-2抑制劑NS398進行干預后研究NS398在新生鼠HIBD中的保護作用，為臨床防治新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemicencephalopathyHIE)尋求新的途徑。 方法：7日齡(postnatalday7，P7)Wistar

3、大鼠，采用Rice法建立新生鼠HIBD模型，隨機分成正常對照組、缺氧缺血組(HIBD組)、NS398干預組。于缺氧缺血(hypoxia-ischemia,HI)后2、6、24、72小時、7天取腦，其中干預組分別于處置前30分鐘分別給予5、20、40mg/kgNS398進行干預，選擇出其中最為合適的劑量后，再增加HI后2、6小時干預組；HE染色觀察組織病理改變，計數(shù)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)；免疫組化、圖像分析軟件檢測雙側腦半球橫截面積之比以及

4、免疫細胞化學陽性數(shù)表達變化；TUNEL法檢測腦組織細胞凋亡。 結果：(1).HI處置后2小時COX-2即見明顯免疫細胞化學陽性表達，在6小時-24小時后最高，并持續(xù)增高到7天后；對照組可見微量免疫細胞化學陽性表達。HIBD組明顯高于對照組(p＜0.01)。免疫細胞化學陽性表達細胞主要見于星形膠質細胞及神經(jīng)元細胞，其中以星形膠質細胞為最明顯；表達部位主見于皮質、海馬位置；血管旁表達最為明顯。(2).三種劑量的NS398干預后，檢測

5、免疫細胞化學陽性表達均較HIBD組明顯下降(p＜0.01)；5mg/kg給藥組明顯高于20及40mg/kg給藥組(p＜0.05)；20及40mg/kg給藥組除HIBD7d觀察組p＜0.01外未見顯著區(qū)別(p＞0.05)；術后2、6h給藥組與術前20mg/kg給藥組間于24、72h及7d時陽性表達存在顯著區(qū)別(p＜0.05)；術后2h給藥組與與術后6h給藥組組間陽性表達無顯著區(qū)別(p＞0.05)。(3).HI后患側腦組織橫截面積下降。HI

6、后7d，HIBD組患側與對側腦半球橫截面積之比(L:RAREA)較對照組明顯降低(p＜0.01)；NS398干預組L:RAREA值明顯高于HIBD組(p＜0.01)。(4).HI后7d，HIBD組患側海馬CA1區(qū)細胞膜和核膜完整、核仁清楚的存活神經(jīng)元數(shù)目明顯少于對照組(p＜0.01)，NS398干預組較HIBD組明顯增多(p＜0.01)。(5).HIBD新生鼠患側HI后24hTUNEL染色陽性細胞數(shù)較多，至HI后7d明顯減少(p＜0.0

7、1)。HI后24h、7d，HIBD組凋亡細胞數(shù)均明顯高于對照組(p＜0.01)。NS398干預后均較HIBD組明顯減少(p＜0.01)；24h及7d凋亡細胞數(shù)比較：術后6h給藥組＞術后2h給藥組＞5mg/kg給藥組＞20及40mg/kg給藥組(p＜0.05)，20及40mg/kg給藥組未見顯著區(qū)別(p＞0.05)。 結論： 1.7日齡Wistar大鼠，結扎一側頸總動脈后予低氧(8％O2)2.0小時，制成HIBD模型，患側

8、腦組織可見梗死灶及萎縮現(xiàn)象，神經(jīng)細胞壞死、凋亡，模型成功可行。 2.HIBD新生鼠患側腦組織COX-2免疫陽性細胞數(shù)明顯增高，反映新生鼠腦損傷時存在COX-2表達明顯增強；并提示其于損傷后2h即見明顯產(chǎn)生，約6-24h為其表達高峰時期，72h后出現(xiàn)衰減，并持續(xù)至7d；COX-2免疫陽性細胞表達主要為星形膠質細胞，并在小血管周圍明顯增強，說明HIBD時COX-2增高與血管源性的炎癥因子及內(nèi)皮細胞參與密切相關，可能存在相互協(xié)同作用。

9、以上均說明其為神經(jīng)早期損傷程度的一個重要指標并和損傷的持續(xù)存在相伴隨。 3.NS398能顯著減輕神經(jīng)元損傷，減少HIBD大鼠患側腦組織凋亡細胞數(shù)，并明顯減輕患側腦萎縮程度。說明腹腔注射NS398對HIBD的神經(jīng)損害具有保護作用。其應用結果同時再次證明了缺氧缺血對發(fā)育中腦組織的病理損傷中，COX-2的大量產(chǎn)生是導致?lián)p傷的發(fā)生發(fā)展過程中的一個重要因素。 4.初步證明20mg/kg為NS398應用于新生鼠的合理劑量。并說明其可