選擇性COX-2抑制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠胃潰瘍愈合的影響.pdf

1、研究背景 選擇性COX-2抑制劑是近年出現(xiàn)的新型NSAIDs，被認(rèn)為藥理作用強(qiáng)，胃腸道副作用低。但選擇性COX-2抑制劑的胃腸道安全性是否真如大家期望的那樣高，這一點(diǎn)尚存有爭(zhēng)議。近來有研究者發(fā)現(xiàn)，這類藥物可能同傳統(tǒng)的NSAIDs一樣，也會(huì)影響胃潰瘍的愈合，但其機(jī)制目前尚不明了。研究表明，胃潰瘍的愈合與胃酸分泌、胃粘膜上皮細(xì)胞增殖、潰瘍底部微血管形成及ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活等環(huán)節(jié)密切相關(guān)。 目的和意義 該研究以乙

2、酸性大鼠胃潰瘍模型為基礎(chǔ)，旨在明確以下幾個(gè)方面的問題： 1、選擇性COX-2抑制劑對(duì)胃潰瘍愈合及胃組織PGs代謝有何影響。 2、從胃酸分泌、胃粘膜上皮細(xì)胞增殖以及潰瘍底部微血管形成的角度探討選擇性COX-2抑制劑延緩胃潰瘍愈合的機(jī)制。 3、探討選擇性COX-2抑制劑對(duì)與胃酸分泌密切相關(guān)的H+，K+-ATPase，與上皮細(xì)胞增殖有關(guān)的HGF及其受體c-Met，與微血管形成有關(guān)的bFGF及其受體bFGFR表達(dá)的影響，

3、以期能從分子水平上闡明其延緩胃潰瘍愈合的機(jī)制。 4、研究選擇性COX-2抑制劑對(duì)ERK通路的影響，以期能從信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的角度探討其延緩胃潰瘍愈合的機(jī)制。 結(jié)果 1、塞來昔布對(duì)胃潰瘍愈合的影響 制模術(shù)后第3日潰瘍面積為33.3±7.4mm2。制模術(shù)后第6日，生理鹽水組潰瘍面積為24.5±6.4mm2，顯著小于第3日。塞來昔布組潰瘍面積為28.0±5.2mm2，與第3日無顯著性差異。制模術(shù)后第6日，生理鹽水組潰瘍

4、面積與塞來西布組無顯著性差異。制模術(shù)后第9日，生理鹽水組和塞來昔布組的潰瘍面積分別為11.9±3.1mm2和19.7±3.8mm2，與第3日相比均有明顯縮小，但塞來昔布組潰瘍面積幾乎是生理鹽水組的1.7倍(P＜0.01)，說明塞來昔布可顯著延緩胃潰瘍的愈合。 2、塞來昔布對(duì)胃潰瘍大鼠胃組織PGs代謝的影響 (1)制模前后COX-1和COX-2表達(dá)的變化免疫組化染色顯示，正常大鼠胃粘膜有大量COX-1和少量COX-2蛋白表

5、達(dá)。制模術(shù)后第3日，潰瘍旁胃粘膜內(nèi)COX-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與正常大鼠相似，而COX-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量則比正常大鼠明顯增加。WesternBlotting檢測(cè)顯示，正常大鼠胃組織COX-1蛋白水平較高，而COX-2蛋白水平則很低。制模術(shù)后第3日，胃潰瘍組織COX-2蛋白水平顯著增高，為正常大鼠的10.8倍(P＜0.01)，而COX-1蛋白水平則無明顯改變。 (2)塞來昔布對(duì)COX活性及PGE2含量的影響制模術(shù)后第3日，胃潰瘍組織COX

6、活性和PGE2含量顯著增高，分別約為正常大鼠的4倍和6倍。制模術(shù)后第6日和第9日，生理鹽水組COX活性和PGE2含量與第3日相比無明顯變化。制模術(shù)后第6日和第9日，塞來昔布組COX活性和PGE2含量均顯著低于生理鹽水組(P＜0.01)。上述結(jié)果說明，塞來昔布能通過抑制COX活性降低胃潰瘍組織內(nèi)PGE2含量。 3、塞來昔布對(duì)胃潰瘍大鼠胃酸分泌的影響 (1)塞來昔布對(duì)胃液總酸度的影響正常大鼠胃液總酸度為14.8±3.4mmo

7、l/L。制模術(shù)后第3日，胃液總酸度降低至6.4±1.5mmol/L，顯著低于正常大鼠。制模術(shù)后第6日和第9日，生理鹽水組胃液總酸度與第3日相當(dāng)，而塞來昔布組分別為10.6±3.1mmol/L和12.5±2.2mmol/L，顯著高于第3日。制模術(shù)后第6日和第9日，塞來昔布組胃液總酸度均顯著高于生理鹽水組(P＜0.05，P＜0.01)，可見塞來昔布能明顯增強(qiáng)胃酸分泌。 (2)塞來昔布對(duì)H+，K+-ATPasemRNA表達(dá)的影響制模術(shù)

8、后第3日，胃潰瘍組織H+，K+-ATPasemRNA表達(dá)明顯降低，僅為正常大鼠的37％。制模術(shù)后第6日和第9日，生理鹽水組H+，K+-ATPasemRNA表達(dá)與第3日相比無明顯變化，而塞來昔布組則顯著高于第3日。制模術(shù)后第6日和第9日，塞來昔布組H+，K+-ATPasemRNA表達(dá)均高于生理鹽水組，分別為生理鹽水組的2.3倍和2.7倍(P＜0.01)，提示塞來昔布可顯著上調(diào)H+，K+-ATPasemRNA表達(dá)。 (3)塞來昔布對(duì)

9、壁細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響正常大鼠壁細(xì)胞胞漿內(nèi)可見大量線粒體，線粒體間有較多聚集著大量微絨毛的分泌小管，提示胃酸分泌功能活躍。制模術(shù)后第3日，潰瘍旁胃粘膜內(nèi)壁細(xì)胞分泌小管數(shù)量減少，微絨毛稀疏，微管泡系統(tǒng)增多，提示胃酸分泌功能減低。與制模術(shù)后第3日相比，制模術(shù)后第6日和第9日，生理鹽水組和塞來昔布組壁細(xì)胞分泌小管和微絨毛數(shù)量均有所增加，但兩組間無顯著差異，說明塞來昔布對(duì)壁細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)無明顯影響。 4、塞來昔布對(duì)胃潰瘍大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞增

10、殖的影響 (1)塞來昔布對(duì)PCNA表達(dá)的影響正常大鼠胃粘膜內(nèi)PCNA陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于胃小凹區(qū)域的腺管上皮，呈帶狀分布，形成細(xì)胞增殖帶。制模術(shù)后潰瘍旁胃粘膜內(nèi)PCNA陽(yáng)性細(xì)胞比正常大鼠增多，細(xì)胞增殖帶增寬。定量分析顯示，正常大鼠PCNALI為11.2±2.8％。制模術(shù)后第3日，PCNALI增加至16.4±2.3％。制模術(shù)后第6日和第9日，生理鹽水組PCNALI比第3日更高，而塞來昔布組則與第3日無明顯差異。制模術(shù)后第6日和第9日

11、，塞來昔布組PCNALI均顯著低于生理鹽水組(P＜0.05，P＜0.01)，說明塞來昔布對(duì)胃粘膜上皮細(xì)胞增殖有明顯抑制作用。 (2)塞來昔布對(duì)HGF和c-Met蛋白表達(dá)的影響WesternBlotting檢測(cè)顯示，制模術(shù)后第3日，胃潰瘍組織HGF和c-Met蛋白水平顯著增高，分別為正常大鼠的4.5倍和1.8倍。制模術(shù)后第6日和第9日，生理鹽水組和塞來昔布組HGF蛋白水平均維持在與第3日相當(dāng)?shù)乃?，兩組在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)上均無顯著性差異

12、。制模術(shù)后第6日和第9日，生理鹽水組c-Met蛋白水平比第3日更高，而塞來昔布組則與第3日無明顯差異。制模術(shù)后第6日和第9日，塞來昔布組c-Met蛋白水平均顯著低于生理鹽水組，分別為生理鹽水組的56％和47％(P＜0.01)。上述結(jié)果表明，塞來昔布能夠下調(diào)c-Met蛋白表達(dá)，而對(duì)HGF蛋白表達(dá)無影響。 5、塞來昔布對(duì)潰瘍底部微血管形成的影響 (1)塞來昔布對(duì)潰瘍底部微血管數(shù)量的影響制模術(shù)后第6日，生理鹽水組和塞來昔布組微

13、血管數(shù)量分別為28.5±5.9個(gè)/視野和23.1±5.8個(gè)/視野，兩組無顯著性差異。制模術(shù)后第9日，生理鹽水組和塞來昔布組微血管數(shù)量分別為42.9±6.8個(gè)/視野和30.6±6.2個(gè)/視野，差異有顯著性(P＜0.01)，可見塞來昔布能夠明顯抑制潰瘍底部微血管的形成。 (2)塞來昔布對(duì)bFGF和bFGFRmRNA表達(dá)的影響正常大鼠胃組織僅有少量bFGF和bFGFRmRNA表達(dá)，制模術(shù)后第3日，胃潰瘍組織內(nèi)二者水平顯著增加，分別為正

14、常大鼠的6.0倍和4.6倍。制模術(shù)后第6日和第9日，生理鹽水組二者水平比第3日更高，而塞來昔布組則與第3日無明顯差異。制模術(shù)后第9日，塞來昔布組bFGF和bFGFRmRNA水平均顯著低于生理鹽水組，分別為生理鹽水組的59％和46％(P＜0.01)。以上結(jié)果說明，塞來昔布可以明顯下調(diào)bFGF和bFGFRmRNA的表達(dá)。 6、塞來昔布對(duì)胃潰瘍大鼠胃組織p-raf-1和p-ERK蛋白水平的影響正常大鼠胃組織p-raf-1和p-ERK蛋

15、白水平較低，制模術(shù)后第3日，胃潰瘍組織內(nèi)二者水平分別為正常大鼠的5.4倍和7.1倍。制模術(shù)后第6日和第9日，生理鹽水組二者水平與第3日相當(dāng)，而塞來昔布組則明顯低于第3日。制模術(shù)后第6日和第9日，塞來昔布組p-raf-1和p-ERK蛋白水平均顯著低于生理鹽水組，表明塞來昔布能抑制raf-1/ERK這一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化。 結(jié)論 1、選擇性COX-2抑制劑能顯著延緩乙酸性大鼠胃潰瘍的愈合過程，同時(shí)能顯著降低胃組織內(nèi)PGs含量

16、，提示COX-2源性PGs對(duì)乙酸性大鼠胃潰瘍的愈合過程起著重要的促進(jìn)作用。 2、乙酸性大鼠胃潰瘍愈合過程中，胃組織內(nèi)H+，K+-ATPasemRNA表達(dá)及胃酸分泌顯著降低。選擇性COX-2抑制劑可以通過上調(diào)H+，K+-ATPasemRNA表達(dá)，增強(qiáng)胃酸分泌，提示選擇性COX-2抑制劑延緩乙酸性大鼠胃潰瘍愈合的機(jī)理之一可能是通過刺激壁細(xì)胞胃酸分泌，加強(qiáng)了對(duì)潰瘍底部新生肉芽組織的消化作用。 3、乙酸性大鼠胃潰瘍愈合過程中，胃

17、組織內(nèi)與上皮細(xì)胞增殖有關(guān)的HGF及其受體c-Met蛋白表達(dá)，與血管形成有關(guān)的bFGF及其受體bFGFRmRNA表達(dá)顯著上調(diào)。選擇性COX-2抑制劑可以通過下調(diào)c-Met蛋白表達(dá)抑制胃粘膜上皮細(xì)胞的增殖，通過下調(diào)bFGF及bFGFRmRNA表達(dá)抑制胃潰瘍底部肉芽組織中微血管的形成，從而延緩乙酸性大鼠胃潰瘍的愈合。 4、選擇性COX-2抑制劑能顯著降低乙酸性胃潰瘍大鼠胃組織內(nèi)p-raf-1和p-ERK蛋白水平，提示選擇性COX-2抑