丁酸梭菌C-,2-菌株對鮸魚腸道微生態(tài)調(diào)控作用與機理研究.pdf

1、本課題以從雞腸道分離的丁酸梭菌C<,2>菌株為研究對象，在對其進行生化和分子生物學鑒定的基礎(chǔ)上，研究了該菌株抗性產(chǎn)酶特性、抑菌特性；并以鮸魚為試驗動物，研究了該菌株對其生長、消化酶、體液免疫、腸道微生態(tài)調(diào)控效用、與果寡糖的協(xié)同作用及相關(guān)的機理。主要研究結(jié)果如下： 1、通過對C<,2>菌株的菌落形態(tài)、生化及分子生物學的鑒定，確定該菌株為丁酸梭菌。 2、試驗研究了丁酸梭菌C<,2>菌株對溫度、膽酸鹽及抗生素的耐受性。結(jié)果表明

2、，C<,2>菌株在100℃的條件下，至少可以存活10min；與氯霉素、青霉素、先鋒Ⅵ、乙酰螺旋霉素可以共同的使用，而不會影響丁酸梭菌的活性；在膽酸鹽濃度為5mg/ml時，能較好地存活。 3、濾紙片瓊脂平板擴散法抑菌結(jié)果表明，該菌株可以有效地抑制遲緩愛德華氏菌、鰻弧菌和嗜水氣單胞菌，抑菌效果要優(yōu)于硫酸鏈霉素(P<0.05)；與枯草芽孢桿菌相比較，在12、18、24、36、48h五個時間段中，丁酸梭菌C<,2>菌株和枯草芽孢桿菌對遲

3、緩愛德華氏菌的抑制差異不顯著(P>0.05)；在12、18、24h三個時間段里，對鰻弧菌的抑制作用大于枯草芽孢桿菌(P<0.05)，但是從36h起兩者對鰻弧菌的抑制沒有差異；對嗜水氣單胞菌的抑制，在12h，枯草芽孢桿菌高于丁酸梭菌C<,2>(P<0.05)，而在隨后的時間內(nèi)，兩者差異不顯著。 4、在構(gòu)建鮸魚腸道上皮細胞模型的基礎(chǔ)上，進行了黏附試驗。結(jié)果表明，該菌株可以降低鰻弧菌在鮸魚腸道上皮細胞的黏附，而且活菌要優(yōu)于滅活菌。丁酸

4、梭菌C<,2>對鮸魚腸道上皮細胞的黏附率為7.39±1.85，低于鰻弧菌(P<0.05)；對細胞的損傷率為1.02±0.35，顯著低于鰻弧菌對細胞的損傷率(P<0.05)；黏附后丁酸梭菌組對細胞的成活率的影響與正常對照組比較，差異不顯著；當丁酸梭菌C<,2>、鰻弧菌與腸道上皮細胞共同培養(yǎng)時，使鰻弧菌的黏附率下降7.03％(P<0.05)；排斥試驗與替代試驗表明，丁酸梭菌C<,2>可以使鰻弧菌的黏附率分別降低8.97％和6.02％。

5、 5、在本試驗條件下，丁酸梭菌C<,2>菌株可以改善鮸魚的生長。隨著丁酸梭菌C<,2>添加量的增加，日增重、特定生長率在最高劑量組(10<'9>CFU g<'-1>)分別達到1.62+0.36g/D，0.58±0.09％，顯著高于對照組(P<0.05)；而餌料系數(shù)降低為1.89±0.39，顯著低于對照組(P<0.05)。 6、該菌株可以提高腸道鮸魚消化酶的活性。在添加量為10<'9>CFU g<'-1>時，肝胰臟淀粉酶活性明顯

6、增強，達到4200.0±98.75U/g(P<0.05)：在幽門盲囊和前腸部位，淀粉酶的活性在添加量大于10<'5>CFU g<'-1>時，其活性都顯著高于對照組(P<0.05)；后腸淀粉酶活性，在10<'7>CFU g<'-1>顯著高于對照組(P<0.05)。蛋白酶的活性在胃、幽門盲囊和前腸沒有隨著丁酸梭菌的添加而發(fā)生顯著的變化，在后腸蛋白酶活性在添加到10<'9>CFU g<'-1>時，顯著增加(P<0.05)。脂肪酶的活性沒有隨該

7、菌株添加量的增加而發(fā)生顯著變化。 7、體液免疫的試驗數(shù)據(jù)表明，添加丁酸梭菌C<,2>菌株可以提高鮸魚血清和體表粘液溶菌酶活性，在添加10<'9>CFU g<'-1>時，顯著高于對照組(P<0.05)；同時可以提高酸性磷酸酶和酚氧化酶的活性(P<0.05)；增加血漿中的IgM濃度(P<0.05)。 8、丁酸梭菌C<,2>菌株在鮸魚腸道可以存活。當以10<'8>CFU g<'-1>劑量飼喂娩魚時，活菌計數(shù)顯示該菌株在前、中、

8、后腸分別為6.43±0.32、6.36±0.22、7.28±0.28 logCFU g<'-1>。 9、假單胞菌是覦魚腸道的優(yōu)勢菌群。丁酸梭菌C<,2>的添加可以影響其腸道的菌群結(jié)構(gòu)。促進雙歧桿菌生長，抑制大腸桿菌、腸產(chǎn)氣桿菌和短桿菌，有可能促進發(fā)光桿菌的增長。同時對厭氧菌總數(shù)影響不顯著(P>0.05)，顯著降低了好氧菌總數(shù)(P<0.05)。 10、丁酸梭菌和果寡糖具有協(xié)同作用。當兩者共同添加到日糧當中時，可以顯著提高鮸