C-Met信號阻斷對肝癌細胞生長和運動能力的影響.pdf

1、近年,在研究腫瘤發(fā)生機制的基因調(diào)控上,發(fā)現(xiàn)一種原癌基因c-met與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),c-met與其配體SF/HGF(Scatter factor/Hepatocyte growth factor)構(gòu)成的信號通路在腫瘤轉(zhuǎn)移中起著關(guān)鍵作用.選擇性地阻滯腫瘤細胞的信號通路,控制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移是當前極具吸引力的研究熱點.在該研究中,我們利用c-met反義核酸質(zhì)粒及U1SnRNA/核酶/反義c-met復合體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌SF7721細胞株,

2、對c-met進行轉(zhuǎn)錄水平上的封閉并對比轉(zhuǎn)染前后其生長的變化,以此探討阻斷HGF/SF-c-met信號轉(zhuǎn)導在肝癌中的作用.一、反義c-met真核細胞表達質(zhì)粒的構(gòu)建.為深入研究c-met/HGF通路在肝癌生長和轉(zhuǎn)移中的作用,我們選擇SF+SMMC7721細胞(SF/HGF全長cDNA轉(zhuǎn)染SMMC7721細胞).作c-met反義RNA轉(zhuǎn)染靶細胞.二、反義c-met表達質(zhì)粒與核酶/c-met反義核酸復合體質(zhì)粒及空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SF7721細胞.利用

3、脂質(zhì)體DOSPER包埋pTracer-CMV2-antisense-c-met真核細胞表達質(zhì)粒U1SnRNA/核酶/Met復合體質(zhì)粒和空白對照pTracer-CMV2表達質(zhì)粒及復合體對照組質(zhì)粒(6μIDOSPER/1.5μgDNA),進行體外轉(zhuǎn)染入SF7721細胞內(nèi).三、c-met反義寡核苷酸鏈、反義c-met構(gòu)建質(zhì)粒及其核酶與c-met反義核酸復合體質(zhì)粒對肝癌SF7721細胞的影響.用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染c-met反義核酸質(zhì)粒,核酶/反義復合體質(zhì)

4、粒的SF7721細胞進行體內(nèi)外實驗,比較轉(zhuǎn)染前后細胞的生長和運動能力.四、小結(jié)c-met/HGF信號通路在胚胎的細胞分化和腫瘤的形成和生長過程中起著重要的作用,SF/HGF和c-met在多種腫瘤中呈高表達,關(guān)系著細胞的運動、離散、血管形成等.我們通過反義技術(shù)選擇c-met為靶基因,構(gòu)建出c-met真核表達質(zhì)粒,并同時運用核酶/反義核酸復合體質(zhì)粒來阻斷該通路,成功地降低了c-met的表達及成瘤性.該研究為探討反義c-met及核酶對肝癌細胞