三肽化合物酪絲纈肽（YSV）對(duì)肺癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的治療作用及其機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察三肽化合物酪絲纈肽(Tyroservatide，YSV)對(duì)肺癌生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移的治療作用，并初步探討其可能的作用機(jī)制。 方法：1.建立C57BL/6J小鼠Lewis肺癌自發(fā)肺轉(zhuǎn)移模型：觀察YSV對(duì)Lewis肺癌皮下腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用；觀察YSV對(duì)Lewis肺癌轉(zhuǎn)移的抑制作用，計(jì)算小鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。 2.建立人肺癌A549裸鼠移植瘤模型，觀察YSV對(duì)A549皮下腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用；建立人肺癌A549裸鼠原位種植肺

2、內(nèi)自發(fā)轉(zhuǎn)移模型，觀察YSV對(duì)A549肺內(nèi)轉(zhuǎn)移的抑制作用，計(jì)算肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。 3.應(yīng)用MTT法觀察YSV對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠Lewis肺癌細(xì)胞(LLC)和人肺癌A549細(xì)胞增殖的抑制作用；應(yīng)用MTT法觀察YSV對(duì)體外培養(yǎng)的A549細(xì)胞與Matrigel膠粘附能力的影響。應(yīng)用重組基質(zhì)膜實(shí)驗(yàn)觀察YSV對(duì)A549細(xì)胞侵襲能力的影響。 4.用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫印跡的方法，觀察YSV對(duì)人肺癌自發(fā)轉(zhuǎn)移模型肺部轉(zhuǎn)移腫瘤組織中ICAM-

3、1的mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響。 結(jié)果：1.YSV能顯著抑制小鼠Lewis肺癌在C57BL/6J小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)，YSV(320μg/kg/d)組小鼠皮下腫瘤的瘤重及瘤體積與生理鹽水組比較具有顯著性差異(P＜0.05)，抑瘤率可達(dá)30.8％。YSV(160μg/kg/d、80μg/kg/d)組小鼠皮下腫瘤的瘤重及瘤體積均低于生理鹽水組，但與生理鹽水組比較無(wú)顯著性差異，(P＞0.05)。YSV能夠明顯抑制Lewis肺癌轉(zhuǎn)移模型小鼠

4、腫瘤肺內(nèi)自發(fā)轉(zhuǎn)移，YSV(320μg/kg/d)組肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)與生理鹽水組比較具有顯著性差異(P＜0.05)，轉(zhuǎn)移抑制率達(dá)24.52％。YSV(160μg/kg/d、80μg/kg/d)組小鼠的肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)均少于生理鹽水組，但與生理鹽水組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。肺組織切片HE染色結(jié)果顯示YSV可以降低Lewis肺轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目，減小轉(zhuǎn)移灶的體積，減少血管內(nèi)瘤栓的形成。 2.YSV(320μg/kg/d、160μg/kg/

5、d、80μg/kg/d)連續(xù)腹腔給藥40天能夠明顯抑制人肺癌A549裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)，各組瘤重和瘤體積均低于生理鹽水組，且與生理鹽水組比較具有顯著性差異(P＜0.05)，當(dāng)用藥劑量為320μg/kg/d時(shí)，抑瘤率可達(dá)46.97％。人肺癌A549細(xì)胞懸液接種植于裸鼠右肺內(nèi)，YSV(320μg/kg/d)連續(xù)腹腔給藥54天能夠明顯抑制人肺癌A549的肺內(nèi)自發(fā)轉(zhuǎn)移，YSV組的肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)與生理鹽水組比較具有顯著性差異(P＜0.05)，轉(zhuǎn)移抑制

6、率可達(dá)31.43％。肺組織切片HE染色結(jié)果顯示：YSV可以降低A549肺轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目，減小轉(zhuǎn)移灶的體積，減少血管內(nèi)瘤栓的形成。3.各劑量YSV(100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml和0.01μg/ml)作用24、48、72hrs均能明顯抑制LLC細(xì)胞和A549細(xì)胞的增殖，與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。各劑量YSV(10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml和0.001μg

7、/ml)作用24、48、72hrs均能明顯抑制A549細(xì)胞與Matrigel膠粘附，與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。YSV(10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml)在體外作用48hrs后可以顯著抑制A549細(xì)胞的侵襲能力，穿過(guò)包被Matrigel膠、底部涂有FN的Transwell小室的細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.05)。 4.YSV能夠下調(diào)人肺癌A54

8、9肺內(nèi)自發(fā)轉(zhuǎn)移模型肺部腫瘤組織中ICAM-1的mRNA和蛋白表達(dá)，與生理鹽水組比較有顯著性差異，P＜0.05。 結(jié)論： YSV對(duì)小鼠Lewis肺癌和人肺癌A549的生長(zhǎng)有抑制作用，對(duì)小鼠Lewis肺癌的肺轉(zhuǎn)移和人肺癌A549裸鼠肺內(nèi)自發(fā)轉(zhuǎn)移具有明顯的抑制作用。YSV能夠抑制小鼠Lewis肺癌和人A549肺癌細(xì)胞的增殖以及A549肺癌細(xì)胞的粘附和侵襲，下調(diào)肺癌A549腫瘤組織中ICAM-1的表達(dá)。YSV可通過(guò)降低腫瘤細(xì)胞增殖、粘附