酪絲纈肽對腫瘤轉(zhuǎn)移的治療作用及其機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察三肽化合物酪絲纈肽(Tyroservatide,YSV)對腫瘤轉(zhuǎn)移的治療作用，并初步探討其可能的作用機(jī)制。 方法： 1．建立C57BL/6小鼠黑色素瘤B16-F10人工肺轉(zhuǎn)移模型，觀察YSV對B16-F10人工肺轉(zhuǎn)移的抑制作用，計(jì)算小鼠肺轉(zhuǎn)移瘤灶數(shù)。 2．建立裸鼠人卵巢癌SKOV-3腹腔轉(zhuǎn)移瘤模型，觀察YSV對SKOV-3腹腔轉(zhuǎn)移的抑制作用，計(jì)算SKOV-3腹腔轉(zhuǎn)移裸鼠的生存時間，計(jì)算裸鼠腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)

2、數(shù)。 3．建立裸鼠人結(jié)腸癌HT-29和SW620脾移植后肝轉(zhuǎn)移模型，觀察YSV對HT-29和SW620細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移的抑制作用，計(jì)算肝指數(shù)(肝重/體重)；同時觀察YSV對HT-29和SW620 腫瘤脾移植瘤生長的抑制作用，計(jì)算脾指數(shù)(脾重/體重)。 4．建立小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞和人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞小鼠皮下移植瘤模型，觀察YSV對腫瘤細(xì)胞在動物體內(nèi)增殖的抑制作用。 5．應(yīng)用MTT法觀察YSV對體外培養(yǎng)的小鼠黑色素

3、瘤B16-F10細(xì)胞、人卵巢癌SKOV-3細(xì)胞、人結(jié)腸癌HT-29和SW620細(xì)胞增殖的抑制作用。 6．應(yīng)用MTT法觀察YSV對體外培養(yǎng)的B16-F10 細(xì)胞、SKOV-3 細(xì)胞、HT-29和SW620細(xì)胞與Matrigel膠粘附能力的影響。應(yīng)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察YSV對B16-F10細(xì)胞、SKOV-3細(xì)胞、HT-29和SW620細(xì)胞侵襲能力的影響。 7．應(yīng)用免疫組化方法觀察YSV對B16-F10細(xì)胞和B

4、16-F10人工肺轉(zhuǎn)移模型中腫瘤組織上ICAM-1的蛋白表達(dá)的影響。應(yīng)用免疫印跡的方法、實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，分別觀察YSV對B16-F10細(xì)胞ICAM-1蛋白表達(dá)水平和mRNA水平的影響。 8．應(yīng)用酶譜分析的方法，觀察YSV對SKOV-3、HT-29和SW620細(xì)胞的MMP-2、MMP-9蛋白活性的影響；應(yīng)用免疫印跡技術(shù)觀察SKOV-3、HT-29和SW620細(xì)胞及其體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移組織中MMP-2 和 MMP-9蛋白表達(dá)水平的

5、影響；用實(shí)時熒光定量PCR觀察YSV對SKOV-3、HT-29和SW620細(xì)胞及其體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移組織中MMP-2和MMP-9 mRNA水平的影響。 結(jié)果： 1.YSV(640μg/kg/d)可以顯著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10肺轉(zhuǎn)移灶的形成，抑制率達(dá)62.21％。病理結(jié)果發(fā)現(xiàn)，YSV給藥組與生理鹽水組相比轉(zhuǎn)移灶腫瘤組織面積較小，可見片狀壞死。 2.YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d)可以顯著延長人

6、卵巢癌SKOV-3腹腔轉(zhuǎn)移瘤裸鼠生存時間，生命延長率最高為32.27％；可以顯著抑制SKOV-3腹腔轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)，最高抑制率為52.93％。 3.YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d)可以顯著抑制人結(jié)腸癌HT-29和SW620細(xì)胞的肝轉(zhuǎn)移，同時抑制脾原發(fā)腫瘤的生長。 4.YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d、160μg/kg/d)可以顯著抑制黑色素瘤B16小鼠移植瘤的生長，最高抑制率為54.32

7、％。YSV(640μg/kg/d、320μg/kg/d)可以顯著抑制人結(jié)腸癌HT-29裸鼠移植瘤的生長，最高抑制率為45.67％。 5.YSV可以顯著抑制體外培養(yǎng)的小鼠黑色素瘤B16-F10、人卵巢癌SKOV-3、人腸癌HT-29和SW620細(xì)胞的增殖，其最高抑制率分別可達(dá)50.13％、42.7％、64-32％、63.28％。 6.YSV可以顯著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10、人卵巢癌SKOV-3、人結(jié)腸癌HT-29和S

8、W620細(xì)胞在體外與Matrigel膠的粘附，其最高抑制率分別可達(dá)41.08％、30.87％、38.14％、47.06％；可以顯著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10、人卵巢癌SKOV-3、人結(jié)腸癌 HT-29和SW620細(xì)胞的體外侵襲能力，其最高抑制率分別可達(dá)41.52％、54.55％、62.82％、46.25％。 7.YSV可以顯著抑制B16-F10細(xì)胞及其人工肺轉(zhuǎn)移模型中腫瘤組織上ICAM-1蛋白的表達(dá)，顯著抑制小鼠黑色素瘤B1

9、6-F10細(xì)胞ICAM-1 mRNA水平。 8．YSV可以顯著抑制人卵巢癌 SKOV-3、人結(jié)腸癌 HT-29和SW620細(xì)胞的MMP-2、MMP-9的蛋白活性；可以顯著抑制SKOV-3、HT-29和SW620細(xì)胞及其體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移組織中MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)及mRNA水平。 結(jié)論：YSV下調(diào)ICAM-1、MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白表達(dá)水平，抑制腫瘤細(xì)胞的粘附、侵襲、增殖，從而抑制黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移、卵巢