五肽化合物PLNPK對(duì)抗Thy1系膜增生性腎小球腎炎的治療作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的： 研究五肽化合物PLNPK對(duì)大鼠抗Thy1MsPGN的治療作用，并初步探討其通過(guò)p38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制巨噬細(xì)胞活化以及巨噬細(xì)胞表達(dá)IL-1β的作用機(jī)制。 方法： 1.建立大鼠抗Th1MsPGN模型；通過(guò)測(cè)定抗Thy1MsPGN大鼠24hrs尿蛋白、血中總蛋白、白蛋白、總膽固醇、甘油三酯、尿素氮和肌酐，觀察PLNPK對(duì)MsPGN腎臟功能的影響；免疫熒光法觀察PLNPK對(duì)Thy1MsPGN大鼠腎臟免疫復(fù)合物沉積

2、的影響；HE染色和Masson染色觀察PLNPK對(duì)大鼠Thy1MsPGN腎臟病理?yè)p害的影響；透射電鏡觀察PLNPK對(duì)抗Thy1MsPGN大鼠腎臟微觀病理結(jié)構(gòu)的影響。 2.應(yīng)用免疫組化方法，采用抗CD68單克隆抗體檢測(cè)PLNPK對(duì)抗Thy1MsPGN大鼠腎臟巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)的影響；采用抗CD86單克隆抗體檢測(cè)PLNPK體外對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化的影響。 3.應(yīng)用ELISA技術(shù)，檢測(cè)PLNPK體外對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化后表達(dá)IL

3、-1β的影響；應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，檢測(cè)PLNPK體外對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化后IL-1βmRNA表達(dá)的影響；應(yīng)用Westernblot技術(shù)，檢測(cè)PLNPK體外對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞p38激酶磷酸化的影響。 結(jié)果： 1.PLNPK劑量為100μg/kg/d和200μg/kg/d，給藥7天后至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，給藥組大鼠尿蛋白水平明顯降低，與生理鹽水組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；給藥28天后至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，給藥組大鼠血中總蛋白和

4、白蛋白水平升高，與生理鹽水組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；總膽固醇、甘油三酯、尿素氮和肌酐濃度變化不明顯，與生理鹽水組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PLNPK能減輕大鼠腎臟病理?yè)p傷，可以減少大鼠腎臟原位免疫復(fù)合物的形成；降低腎臟系膜細(xì)胞增生和細(xì)胞外基質(zhì)堆積程度，減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；減少系膜區(qū)電子致密物沉積，減輕腎小球上皮細(xì)胞、足細(xì)胞和基底膜的損傷。 2.PLNPK給藥劑量為100μg/kg/d和200μg/kg/d，可以減

5、少抗Thy1MsPGN大鼠腎臟巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)；PLNPK濃度為1.6mg/ml、3.2mg/ml和6.4mg/ml，在體外可以明顯抑制大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化。 3.PLNPK濃度為1.6mg/ml、3.2mg/ml和6.4mg/ml，可以降低大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化后表達(dá)IL-1β的水平，并抑制巨噬細(xì)胞活化后IL-1βmRNA表達(dá)水平，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PLNPK可以抑制大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化后p38激酶磷酸化水平