6，8-二-三氟亞甲基-7-乙酰氧基白楊素在Caco-2細(xì)胞模型的跨膜轉(zhuǎn)運及首過糖基化速率研究.pdf

1、目的：通過比較白楊素（ChR）及其衍生物6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白楊素（dFMAChR）在人結(jié)腸腺癌（Caco-2）細(xì)胞模型的跨膜轉(zhuǎn)運及首過糖基化速率，為尋找具有良好的藥動學(xué)特性的活性新化學(xué)實體提供實驗依據(jù)。 方法：建立精確靈敏、重復(fù)性好的ChR及dFMAChR的高效液相（HPLC）檢測方法，并測定其理化性質(zhì)；MTT法測定ChR和dFMAChR對Caco-2細(xì)胞的毒性作用。體外培養(yǎng) Caco-2細(xì)胞，用Transwel

2、l建立單層細(xì)胞模型；確定ChR和dFMAChR轉(zhuǎn)運的最佳Ph條件。評價時間、濃度對dFMAChR和ChR的雙向轉(zhuǎn)運的影響，HPLC檢測藥物含量，計算轉(zhuǎn)運速率及表觀滲透系數(shù)。評價時間對ChR和dFMAChR葡萄糖醛酸化產(chǎn)物形成的影響，用β-葡萄糖醛酸苷酶水解葡萄糖醛酸結(jié)合物，HPLC檢測，計算葡萄糖基化速率。 結(jié)果：50μmol/L的ChR和dFMAChR在Ph 7.4，37℃的PBS中孵育24h后，兩者的飽和溶解度分別是4.28

3、±0.56 μmol/L，2.05±0.44 μmol/L。隨著溶液Ph升高dFMAChR穩(wěn)定性（檢測的原藥量）較ChR的穩(wěn)定性顯著提高。MTT法測定結(jié)果表明，在一定濃度范圍內(nèi)，ChR和dFMAChR對Caco-2細(xì)胞毒性作用較小，即使兩者濃度高達100μmol/L，受試物對Caco-2細(xì)胞的增殖活性無顯著抑制作用。Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)21天后，成功建立細(xì)胞單層模型。隨著轉(zhuǎn)運介質(zhì)Ph值升高，dFMAChR和ChR的轉(zhuǎn)運速率降低，但相同濃

4、度下dFMAChR的轉(zhuǎn)運速率顯著快與ChR的轉(zhuǎn)運速率。ChR和dFMAChR的轉(zhuǎn)運依賴于時間和濃度，幾乎呈線性關(guān)系。從Apiral（A，腸腔面）到Basolateral（B,基底面）的轉(zhuǎn)運占優(yōu)勢，但相差不大。而且，無論是從A-B側(cè)轉(zhuǎn)運還是從B-A側(cè)轉(zhuǎn)運dFMAChR較ChR轉(zhuǎn)運速率顯著提高。ChR和dFMAChR的葡萄糖醛酸化產(chǎn)物隨時間的增加而增加，dFMAChR較ChR的糖基化速率顯著降低。結(jié)束轉(zhuǎn)運時，均能在Transwell兩側(cè)檢測

5、到ChR和dFMAChR的葡萄糖醛酸化產(chǎn)物，而且腸腔側(cè)（A側(cè)）檢測代謝產(chǎn)物含量高于基底膜側(cè)（B側(cè)）。 結(jié)論：白楊素經(jīng)選擇性引進三氟甲基和乙酰基后，獲得的衍生物dFMAChR較白楊素化學(xué)穩(wěn)定性提高，水溶性降低。在Caco-2模型中，dFMAChR和ChR均由被動擴散方式轉(zhuǎn)運，dFMAChR的轉(zhuǎn)運速率高于ChR，可能與其化學(xué)穩(wěn)定性提高有關(guān)。另外，dFMAChR葡萄糖醛酸化程度較ChR顯著降低說明其代謝穩(wěn)定性增加，首過代謝是白楊素吸收