8-異丙胺亞甲基橙皮素(IPHP)在大鼠體內(nèi)的藥代動力學研究和體外跨膜轉(zhuǎn)運機制的初探.pdf

1、橙皮素（hesperetin）為蕓香科柑橘屬植物果實提取物，是廣泛存在于柚子和橙子中二氫黃酮類化合物，具有廣泛的藥理學特性，包括抗炎、抗氧化、抗腫瘤等活性。橙皮素口服以后生物利用度較好，但是半衰期較短，口服給藥以后體內(nèi)消除較快，為了維持有效血藥濃度，需要頻繁給藥，這一缺點限制了其在臨床上的應用。為了克服這一缺點，本課題組通過化學合成的方法，合成了一系列的橙皮素衍生物并對其藥理活性進行了篩選。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)7,3′-二甲氧基橙皮素(

2、7,3′-dimethoxy hesperetin，DMHP)具有較強抗炎活性,對A A大鼠繼發(fā)性炎癥具有良好的治療作用。前期研究還發(fā)現(xiàn)8-異丙胺亞甲基橙皮素(IPHP)，在體外具有良好的抗炎活性，對于由LPS刺激RAW264.7細胞產(chǎn)生的TNF-α和IL-6具有明顯的抑制作用。該實驗的目的是建立IPHP在大鼠體內(nèi)的藥動學研究方法，對其進行早期藥動學研究，同時利用MDCK細胞模型來模擬小腸上皮細胞對IPHP的吸收情況，通過對MDCK細胞

3、膜上轉(zhuǎn)運蛋白，如P糖蛋白（P-gp）、多藥耐藥蛋白（MRP2）的研究來探討其吸收及外排機制，為以后的藥理學研究提供依據(jù)，為將來的臨床前研究提供思路。本實驗的主要內(nèi)容包括以下幾個方面：
　　1.IPHP在大鼠體內(nèi)的藥動學研究
　　40只SD大鼠隨機分為：橙皮素組（100mg/kg），IPHP低，中，高劑量組（25,50，100mg/kg）和IPHP靜脈注射組（25mg/kg），每組8只。灌胃，靜脈給藥后不同時間點大鼠眼底靜脈叢

4、取血，用本實驗建立的 HPLC法測定血漿中的橙皮素和IPHP的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時間曲線，計算藥物代謝動力學參數(shù)，分別計算IPHP在低中高3個不同濃度的Tmax(h)：2.3±0.67、2.40±0.55、2.10±0.55；t1/2(h)：6.37±1.91、6.45±1.93、6.61±1.98；Cmax(μg/ml)：1.15±0.32、2.60±0.70、4.36±1.18；AUC(mg/L·h)：9.34±1.68

5、、22.98±4.14、41.63±7.49。橙皮素的Tmax(h)為0.35±0.11，t1/2(h)：3.07±1.12；Cmax(ug/ml)：4.56±1.09，AUC(mg/L·h)：50.23±12.22。與等劑量組的橙皮素相比，IPHP的半衰期明顯延長，血藥濃度液維持在較高的水平，達峰時間延遲，相對生物利用度提高了。
　　2. IPHP在MDCK單層細胞模型上的吸收轉(zhuǎn)運實驗的研究
　　MTT法篩選出安全的適合跨

6、細胞膜轉(zhuǎn)運的藥物濃度（120μΜ以內(nèi)），藥物跨膜轉(zhuǎn)運的實驗分組：7.5,15,30,60,120μΜ五個藥物濃度組以及溫度，pH，轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑組。探討藥物濃度、pH、溫度、P-gp抑制劑維拉帕米、MRP2抑制劑MK-571和丙磺舒對IPHP在體外細胞模型上跨膜轉(zhuǎn)運的影響。實驗取的樣品通過上述建立的HPLC法測定血漿中的藥物的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時間曲線，計算藥物濃度，根據(jù)公式Papp=(dQ/dt)/A×C0和ER=Papp

7、(BL-AP)/Papp(AP-BL)計算不同濃度藥物的Papp(AP-BL)(×10–5)(cm·s-1)：1.49±1.20、2.81±1.20、3.28±0.45、3.45±1.30、3.47±1.27。Papp(BL-AP)(×10–5)(cm·s-1):2.12±0.728、3.87±0.364、4.27±1.16、4.08±2.68、4.15±3.66。外排率分別為：1.41、1.37、1.3、1.18、1.19。溫度和pH